肠炎沙门菌cirA基因缺失株减毒效果及应用研究
发布时间：2021-03-27 20:42
沙门菌给养殖业和人类健康带来严重危害。目前除抗生素外,对于沙门菌病的防制尚无有效办法。疫苗,尤其是减毒活疫苗是一个研究方向。疫苗靶点选择也是沙门菌疫苗研究的核心。基于大肠菌素受体蛋白CirA在细菌生理上的重要作用,本研究以cirA基因为靶基因。利用λ-Red同源重组技术,构建了C50336ΔcirA,并对其生物学特性、LD50和免疫特性进行了评价。具体实施如下:1.肠炎沙门菌rCirA蛋白免疫保护力分析设计针对性引物扩增cirA基因片段,并成功构建了重组质粒pEGX-6p-1-cirA,利用原核表达系统,表达的rCirA蛋白免疫小鼠,并对免疫小鼠血清进行抗体IgG检测;以C50336强毒株攻毒评估免疫效果。结果显示,经SDS-PAGE分析,在70 ku处出现目的蛋白条带并为沉淀表达;免疫小鼠抗体IgG水平持续上升;攻毒试验保护率仅为20%,表明rCirA蛋白对小鼠具有一定的免疫原型和保护力。2.肠炎沙门菌cirA基因缺失株的构建及生物学特性分析本研究利用λ-Red同源重组技术,构建了肠炎沙门菌cirA基因缺失株以及回补株。研究发现,cirA基因缺失株的生长速率和生...
【文章来源】：河北科技师范学院河北省
【文章页数】：74 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
肠炎沙门菌cirA基因的PCR扩增Fig2-1TheamplificationofcirAgeneofS.Enteritidis
第2章肠炎沙门菌rCirA蛋白免疫保护力18图2-2重组质粒pEGX-6p-1-cirA双酶切验证Fig2-2VerificationofpEGX-6p-1-cirArecombinantplasmidbydoubleenzymedigestionM:DL2000PlusDNAMarker;1:pEGX-6p-1;2:pEGX-6p-1-cirA2.3.2rCirA重组蛋白的表达验证将重组载体pEGX-6p-1-cirA转化E.coliBL21（DE3）表达菌株后诱导表达，经SDS-PAGE分析rCirA重组蛋白表达情况。结果显示，在70ku处呈现出与预期一致的目的蛋白条带，而诱导的空载体菌株无此蛋白条带（图2-3）。表明rCirA重组蛋白正确表达。图2-3rCirA蛋白表达的SDS-PAGE分析Fig2-3SDS-PAGEanalysisofrCirAproteinexpressionM:PerstainedproteinMarker;1:pEGX-6p-1/BL21;2:pEGX-6p-1-cirA/BL212.3.3rCirA重组蛋白的可溶性分析对rCirA重组蛋白进行可溶性分析，进行SDS-PAGE分析。结果显示，rCirA菌体蛋白沉淀中出现较浓的特异蛋白质条带，而上清中无该条带（图2-4）。表明rCirA重组蛋白为沉淀表达。
第2章肠炎沙门菌rCirA蛋白免疫保护力18图2-2重组质粒pEGX-6p-1-cirA双酶切验证Fig2-2VerificationofpEGX-6p-1-cirArecombinantplasmidbydoubleenzymedigestionM:DL2000PlusDNAMarker;1:pEGX-6p-1;2:pEGX-6p-1-cirA2.3.2rCirA重组蛋白的表达验证将重组载体pEGX-6p-1-cirA转化E.coliBL21（DE3）表达菌株后诱导表达，经SDS-PAGE分析rCirA重组蛋白表达情况。结果显示，在70ku处呈现出与预期一致的目的蛋白条带，而诱导的空载体菌株无此蛋白条带（图2-3）。表明rCirA重组蛋白正确表达。图2-3rCirA蛋白表达的SDS-PAGE分析Fig2-3SDS-PAGEanalysisofrCirAproteinexpressionM:PerstainedproteinMarker;1:pEGX-6p-1/BL21;2:pEGX-6p-1-cirA/BL212.3.3rCirA重组蛋白的可溶性分析对rCirA重组蛋白进行可溶性分析，进行SDS-PAGE分析。结果显示，rCirA菌体蛋白沉淀中出现较浓的特异蛋白质条带，而上清中无该条带（图2-4）。表明rCirA重组蛋白为沉淀表达。
【参考文献】：
期刊论文
[1]肠炎沙门菌pagC基因缺失株构建及其相关生物学特性研究[J]. 李永慧,苏硕青,李巧玲,吴同垒,张志强. 中华医院感染学杂志. 2019(22)
[2]复方中药混菌发酵制剂对AA肉鸡红细胞免疫功能的影响[J]. 张桂枝,邢启银,靳双星. 中国兽医杂志. 2016(07)
博士论文
[1]肠炎沙门氏菌生物被膜形成相关基因鉴定、缺失株构建及生物学特性研究[D]. 董洪燕.扬州大学 2011
硕士论文
[1]肠炎沙门菌nmpC基因缺失株的生物学特性及免疫效果分析[D]. 苏硕青.河北科技师范学院 2019
[2]鸡细胞免疫应答检测方法的建立及其应用[D]. 唐娟.扬州大学 2019
本文编号：3104188
【文章来源】：河北科技师范学院河北省
【文章页数】：74 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
肠炎沙门菌cirA基因的PCR扩增Fig2-1TheamplificationofcirAgeneofS.Enteritidis
第2章肠炎沙门菌rCirA蛋白免疫保护力18图2-2重组质粒pEGX-6p-1-cirA双酶切验证Fig2-2VerificationofpEGX-6p-1-cirArecombinantplasmidbydoubleenzymedigestionM:DL2000PlusDNAMarker;1:pEGX-6p-1;2:pEGX-6p-1-cirA2.3.2rCirA重组蛋白的表达验证将重组载体pEGX-6p-1-cirA转化E.coliBL21（DE3）表达菌株后诱导表达，经SDS-PAGE分析rCirA重组蛋白表达情况。结果显示，在70ku处呈现出与预期一致的目的蛋白条带，而诱导的空载体菌株无此蛋白条带（图2-3）。表明rCirA重组蛋白正确表达。图2-3rCirA蛋白表达的SDS-PAGE分析Fig2-3SDS-PAGEanalysisofrCirAproteinexpressionM:PerstainedproteinMarker;1:pEGX-6p-1/BL21;2:pEGX-6p-1-cirA/BL212.3.3rCirA重组蛋白的可溶性分析对rCirA重组蛋白进行可溶性分析，进行SDS-PAGE分析。结果显示，rCirA菌体蛋白沉淀中出现较浓的特异蛋白质条带，而上清中无该条带（图2-4）。表明rCirA重组蛋白为沉淀表达。
第2章肠炎沙门菌rCirA蛋白免疫保护力18图2-2重组质粒pEGX-6p-1-cirA双酶切验证Fig2-2VerificationofpEGX-6p-1-cirArecombinantplasmidbydoubleenzymedigestionM:DL2000PlusDNAMarker;1:pEGX-6p-1;2:pEGX-6p-1-cirA2.3.2rCirA重组蛋白的表达验证将重组载体pEGX-6p-1-cirA转化E.coliBL21（DE3）表达菌株后诱导表达，经SDS-PAGE分析rCirA重组蛋白表达情况。结果显示，在70ku处呈现出与预期一致的目的蛋白条带，而诱导的空载体菌株无此蛋白条带（图2-3）。表明rCirA重组蛋白正确表达。图2-3rCirA蛋白表达的SDS-PAGE分析Fig2-3SDS-PAGEanalysisofrCirAproteinexpressionM:PerstainedproteinMarker;1:pEGX-6p-1/BL21;2:pEGX-6p-1-cirA/BL212.3.3rCirA重组蛋白的可溶性分析对rCirA重组蛋白进行可溶性分析，进行SDS-PAGE分析。结果显示，rCirA菌体蛋白沉淀中出现较浓的特异蛋白质条带，而上清中无该条带（图2-4）。表明rCirA重组蛋白为沉淀表达。
【参考文献】：
期刊论文
[1]肠炎沙门菌pagC基因缺失株构建及其相关生物学特性研究[J]. 李永慧,苏硕青,李巧玲,吴同垒,张志强. 中华医院感染学杂志. 2019(22)
[2]复方中药混菌发酵制剂对AA肉鸡红细胞免疫功能的影响[J]. 张桂枝,邢启银,靳双星. 中国兽医杂志. 2016(07)
博士论文
[1]肠炎沙门氏菌生物被膜形成相关基因鉴定、缺失株构建及生物学特性研究[D]. 董洪燕.扬州大学 2011
硕士论文
[1]肠炎沙门菌nmpC基因缺失株的生物学特性及免疫效果分析[D]. 苏硕青.河北科技师范学院 2019
[2]鸡细胞免疫应答检测方法的建立及其应用[D]. 唐娟.扬州大学 2019
本文编号：3104188
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