云南撒坝猪大肠杆菌HPI主要结构基因及其致病性研究

发布时间：2021-03-27 20:55

　　为了探讨云南撒坝猪大肠杆菌HPI主要结构基因及其致病性关系，主要通过PCR扩增实验、菌落原位斑点杂交实验、摄铁实验、动物实验和耐药性实验等方法研究大肠杆菌的致病关系。首先对CVCC1565菌株进行PCR扩增检测得到阳性对照，再以44株优势血清型大肠杆菌菌株为材料，以PCR扩增和菌落原位斑点杂交方法检测高致病性毒力岛（HPI） irp2、irp1、 irp3、irp4和irp5基因，测序，各基因与GENBANK上的序列进行比对得出同源性均在95%以上，另外根据系统进化树的进化距离比较，得出实验菌株在遗传学上具有EIEC、UPEC、Y-pestis、EPEC的特点，蛋白预测结果表明了HPI中HMWP1蛋白条带的差异与糖基化位点有关，磷酸化位点参与细菌的能量代谢和生物氧化，使细菌能捕获铁离子来增强HPI的致病力；SDS-PAGE实验（浓度为0.2mmol/L2-2’-双吡啶）在缺铁的情况下得出10株大肠杆菌优势血清型HPI菌株具有HMWPs的表达；CAS固体培养基中菌株能产生橘黄色晕圈；β-内酰胺类抗生素药敏实验，得出对头孢哌酮、头孢唑啉比较敏感；动物致病性实验得出LD50为102.93μl... 

【文章来源】：云南农业大学云南省

【文章页数】：94 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
基金项目
摘要
Abstract
符号及缩写语说明
1 引言
    1.1 HPI 的研究进展
        1.1.1 HPI 的基本特征
        1.1.2 耶尔森菌 HPI 与 HPI 的关系
        1.1.3 大肠杆菌中 HPI 的研究进展
    1.2 大肠杆菌β-内酰胺药物的研究进展
    1.3 HPI 铁载体的合成
    1.4 研究的创新点、目的意义
    1.5 研究的主要技术路线
2 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验菌株及参考菌株
        2.1.2 实验动物
        2.1.3 实验试剂
        2.1.4 培养基和缓冲液的配制
        2.1.5 主要仪器设备
        2.1.6 主要计算机应用软件
    2.2 实验方法
        2.2.1 优势血清型大肠杆菌 HPI 主要结构基因的 PCR 检测
        2.2.2 优势血清型大肠杆菌HPI主要结构基因的菌落斑点杂交检测
    2.3 优势血清型大肠杆菌药敏实验的判定
    2.4 优势血清型大肠杆菌菌株高分子量蛋白的表达
    2.5 优势血清型大肠杆菌 HPI 铁载体的检测
    2.6 优势血清型大肠杆菌 HPI 的致病性实验
        2.6.1 LD50的测定
        2.6.2 组织病理学观察
3 实验结果与分析
    3.1 云南撒坝猪大肠杆菌优势血清型菌株的获得
    3.2 优势血清型菌株中 HPI 主要结构基因的检测
        3.2.1 菌株中 HPI 主要结构基因的 PCR 检测结果
        3.2.2 菌株中 HPI 主要结构基因的菌落斑点杂交检测结果
        3.2.3 菌株中 HPI 主要结构基因的检测结果及相关性分析
        3.2.4 HPI 主要结构基因测序结果的同源性比较
        3.2.5 HPI 主要结构基因测序结果的进化树的构建
        3.2.6 HPI 主要结构基因测序结果的蛋白质预测分析
    3.3 优势血清型大肠杆菌中 HPI 摄铁功能的比较
        3.3.1 HPI 铁载体的检测
        3.3.2 HPI 实验菌株中 HMWPS 蛋白的表达
    3.4 HPI 实验菌株中β-内酰胺类药物的药敏实验
    3.5 致病性实验与优势血清型大肠杆菌 HPI 菌株关系
        3.5.1 LD50实验与与优势血清型大肠杆菌 HPI 菌株关系
        3.5.2 HE 染色病理切片与优势血清型大肠杆菌 HPI 菌株关系
4 讨论
    4.1 含有 HPI 主要结构基因优势血清型大肠杆菌菌株的致病性及摄铁功能
    4.2 优势血清型大肠杆菌 HPI 高分子量蛋白的表达和蛋白预测结果的关系
    4.3 优势血清型大肠杆菌药敏实验与 HPI 的关系
5 结论
参考文献
附录
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]禽源大肠杆菌耶尔森氏菌强毒力岛核心基因的检测及其irp2和int基因同源性[J]. 冀辉,邵长胜,涂健,黄博言,邵颖,周秀红,汪雪雁,祁克宗.  微生物学通报. 2013(11)
[2]耐药大肠埃希菌β-内酰胺酶基因检测与LAP-2型β-内酰胺酶分子对接研究[J]. 原鸿雁,孙强,尹晶平,高晶晶,苏兆亮,糜祖煌,王胜军,许化溪.  中华医院感染学杂志. 2013(10)
[3]肉鸡源致病性大肠埃希菌中β-内酰胺类抗生素耐药基因的检测[J]. 金彪,伍成奇,唐攀,邱渊皓,刘万华,武宁,王晶钰.  动物医学进展. 2013(04)
[4]动物性食品源大肠杆菌O血清型鉴定及其K88菌毛基因检测[J]. 张艳英,高桂生,史秋梅,高光平,刘申.  中国畜牧兽医. 2013(03)
[5]周口地区猪致病性大肠杆菌血清型调查及耐药性检测[J]. 王汝都,郑爱荣.  黑龙江畜牧兽医. 2013(05)
[6]多重耐药菌中β-内酰胺酶的基因型研究[J]. 陈定强,彭玉婷,罗毓婷,徐韫健,林勇平,杨羚.  检验医学与临床. 2013(01)
[7]禽致病性大肠杆菌强毒力岛摄铁功能与致病性关系的研究[J]. 李叶芳,白灏,彭开松,涂健,祁克宗.  中国兽医科学. 2012(09)
[8]猪源大肠杆菌分离、血清型鉴定及脉冲场凝胶电泳分型[J]. 张媛,郭鑫,蒋玉文,宋立.  畜牧与兽医. 2012(09)
[9]北京部分地区仔猪大肠杆菌病血清型调查[J]. 傅彩霞,郑瑞峰,郭峰,靳兴军,李佳,吴惠明,王玉田,原丽.  黑龙江畜牧兽医. 2012(06)
[10]奶牛乳腺炎源大肠杆菌中耶尔森菌强毒力岛相关基因的检测及序列分析[J]. 徐继英,杨志强,陈化琦,刘俊林,邢娟,李建喜,李宏胜.  中国农业科学. 2012(06)

博士论文
[1]动物源性大肠杆菌O157对β-内酰胺类和氨基糖苷类药物耐药相关机制的研究[D]. 柳巨雄.吉林大学 2005



本文编号：3104207