寨卡病毒结构蛋白基因的原核表达及其多克隆抗体的制备

发布时间：2021-03-28 02:52

　　寨卡病毒（ZIKV）是一种重要的人兽共患病病原。为了在原核表达系统表达ZIKV C、prM和E蛋白并制备相应多克隆抗体,本研究首先对ZIKV C、prM和E蛋白基因序列进行密码子优化,合成后克隆至pMAL-c5x载体中,重组质粒转化于E.coli ER2523,IPTG诱导表达产物用SDS-PAGE及Western blot进行鉴定并通过MBP亲和层析柱进行纯化;将纯化蛋白免疫新西兰大白兔,制备C、prM和E蛋白的兔源多克隆抗体;用IFA和Western blot检测血清抗体效价及特异性。结果显示:本研究利用原核表达系统成功表达了ZIKV C、prM和E蛋白,经过MBP亲和层析柱纯化后获得高纯度的目的蛋白;将ZIKV C、prM和E蛋白免疫新西兰大白兔后均诱导产生特异性多克隆抗体,间接免疫荧光试验表明所制备多克隆抗体均能与ZIKV结合,IFA效价分别为1:1600,1:1600和1:3200;Western blot显示制备的多克隆抗体能特异性识别ZIKV C、prM和E蛋白。该研究结果为进一步开展ZIKV相关研究奠定了基础。 

【文章来源】：中国动物传染病学报. 2020,28(05)北大核心

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

IFA鉴定C、prM、E蛋白多克隆抗体与ZIKV的反应性

p MAL-c5x-ZIKV-C、p MAL-c5x-ZIKV-pr M和p MAL-c5x-ZIKV-E双酶切鉴定

将pMAL-c5x-ZIKV-C、pMAL-c5x-ZIKV-prM和pMAL-c5x-ZIKV-E分别转化至ER2523感受态细胞,经IPTG诱导后,分别取上清液和沉淀进行SDS-PAGE电泳及Western blot鉴定,分析蛋白表达情况。结果显示,pMAL-c5x-ZIKV-C(图2)、pMAL-c5x-ZIKV-prM(图3)和pMAL-c5x-ZIKV-E(图4)表达产物分别在55 kDa、60 kDa和100 kDa左右出现条带,与预期大小一致。图3 SDS-PAGE(A、B)和Western blot (C)验证可溶性ZIKV-pr M蛋白表达与纯化


本文编号：3104739