粪肠球菌CRISPR/Cas系统在大肠杆菌中的功能探索

发布时间：2021-03-28 06:59

　　粪肠球菌Enterococcus faecalis)是人、动物等肠道内生存的正常的微生物菌群；然而,在多数的临床分离菌中普遍存在有致病岛（PAIs）,且与健康肠道分离菌株有非常大的差异。研究表明多数的毒力基因与抗药基因可能由可移动元件携带,如何抑制这些移动元件的水平转移成为当前首要任务。聚集规律间隔的短回文重复序列（CRISPR位点）是在细菌长期的进化和适应过程中所形成的,作为抵御外源基因入侵的一种自我保护机制。主要是利用CRISPR/Cas系统所形组成的免疫体系,产生针对噬菌体、质粒等外源DNA的抑制作用,迫使致病基因及抗药基因转移失败,从而保护宿主基因组的完整性。本实验研究CRISPR/cas基因在大肠杆菌中的功能完整性,即其对外源DNA的抑制作用。通过特异性PCR扩增,发现在本实验室保存的42株临床分离E.faecalis中有11.90%的菌株含有完整的CRISPR/cas基因。经过测序分析发现此片段共有7919bp,其中相邻的四个cas基因与对应序列同源性达99.4%,并在重复区发现有13个间区序列存在,且重复序列具有明显的颈环结构,而L序列相对于参考序列则有一个碱基突变,表明... 

【文章来源】：湖南农业大学湖南省

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
目录
1 前言
    1.1 粪肠球菌概述
    1.2 原核细胞中CRISPR/Cas系统的免疫机制
    1.3 研究的目的与意义
2 材料与方法
    2.1 实验材料及仪器设备
    2.2 试验方法
    2.3 粪肠球菌中CRISPR位点的检测及分析
    2.4 CRISPR/cas位点全长序列的克隆
    2.5 CRISPR/cas位点克隆序列分析
1）质粒构建">    2.6 间区序列（S₁）质粒构建
    2.7 间区质粒转化pCRISPR1-DH5α和pUC18-DH5α检验CRISPR1位点的功能
    2.8 噬菌体侵染重组大肠杆菌
3 结果与分析
    3.1 CRISPR1位点的验证
    3.2 CRISPR1/cas位点全长序列的克隆
    3.3 CRISPR1/cas序列信息学浅析
1构建及鉴定">    3.4 间区序列载体pET28-S₁构建及鉴定
    3.5 CRISPR1/Cas系统机能检验结果
    3.6 噬菌体侵染重组大肠杆菌
4 讨论
    4.1 CRISPR1/cas位点及其在粪肠球菌中的检测
    4.2 CRISPR1/cas基因的克隆
    4.3 重组菌对间区重组质粒免疫作用
    4.4 CRISPR1/Cas介导的获得性抗噬菌体免疫
5 结论
参考文献
附录
符号说明
致谢
作者简历



本文编号：3105097