重组表达兔瘟病毒VP60蛋白的巴氏杆菌突变株的构建
发布时间：2021-03-28 11:44
兔病毒性出血症和兔巴氏杆菌病是以高发病率和高致死率为特点的两种接触性传染病,它们对家兔养殖业造成了严重的经济损害。疫苗免疫是防控这两种传染病的主要策略,目前在市场上使用最广泛的为兔瘟组织灭活苗和巴氏杆菌灭活疫苗以及弱毒疫苗,兔瘟组织灭活苗的主要缺陷是在疫苗制备过程中可能存在的散毒风险,以及制作成本较高且疫苗成分复杂;兔巴氏杆菌灭活苗的缺陷是对不同血清型缺乏有效的交叉保护力,而兔巴氏杆菌弱毒疫苗多采用化学突变法,背景不明。如今,越来越多的学者将目光转向兔瘟病毒和兔巴氏杆菌新型疫苗的研发上,希望能研制出一种安全有效的疫苗。CRISPR/Cas9等基因编辑技术可通过切割基因组而达到基因编辑的目的。尽管g DNA/Ng Ago基因编辑系统并不能介导真核细胞基因组的切割,但本实验室已有研究应用该系统及同源重组原理成功构建了多株巴氏杆菌基因缺失株,即△lyi-GXPM、△opa-GXPM、△hyae-GXPM、△pilia-GXPM和△fhgb-GXPM,该研究成功的验证了Na Ago/g DNA基因编辑系统在巴氏杆菌中操作的可行性。因此,本研究拟通过g DNA/Ng Ago基因编辑系统实现巴氏杆...
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：75 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
RHDV的基因组结构(Abrantesetal2012)
的免疫保护作用（Le Gall-Recule G 2011）。对 RHDV 毒株的核苷酸序列同源性分析比对，将致G1、G2、G3、G4、G5 和 G6 共 6 个基因群(Le G 1997 年，RHDV 遗传进化关系首次被系统性的分不同地域的 RHDV 毒株(Nowotny N et al 1997)。同源性，并将样品分为三个分支，与之前的报道所发生的年份而不是地域进行分支(Oem JK et alt al 2004)。Le Gall 等人在法国毒株中也发现同样三个基因群：G1、G2 和 G3(Le Gall G et al 1998国消失了，取而代之的出现了新的三个基因群：的基因群 G5；G6，基因群 G6 为抗原突变株 1998)。
图 3-1 pSHK5Ts 质粒图谱Fig3-1 Plasmid of pSHK5Ts及酶工具r-Fidelity DNA polymerase，Taq DNA polymerase，D Biotech 公司）；T4-PNK、T4-DNA ligase bufferolymerase，dNTPs，Trans 2K plus DNA marker，Tran司）；质粒小提试剂盒、细菌基因组提取试剂盒、无21
【参考文献】：
期刊论文
[1]兔多杀性巴氏杆菌C51-17株在疫苗效力检验中保存方法的研究[J]. 张媛,李建,张磊,王秀丽,张立春,丁家波. 中国兽药杂志. 2014(03)
[2]检测兔出血症病毒荧光定量方法的建立与应用[J]. 刘行波,原东伟,刘家森,郭冬春,姜骞,林欢,司昌德,崔玉东,曲连东. 黑龙江畜牧兽医. 2013(03)
[3]兔出血症病毒胶体金免疫层析试纸条诊断方法的建立及初步应用[J]. 蔡少平,王芳,贾华敏,张海彬,李超美,范志宇,胡波,熊富强,魏后军. 畜牧兽医学报. 2012(11)
[4]兔出血症病毒RT-PCR检测方法的建立及其临床应用[J]. 胡波,魏后军,王芳,范志宇,徐鹏,徐为中,薛家宾,何孔旺. 畜牧兽医学报. 2010(11)
[5]禽多杀性巴氏杆菌PCR诊断方法的建立[J]. 亓英芳,刘家森,张在平,刘思国,曲连东. 黑龙江畜牧兽医. 2008(07)
[6]应用巢氏PCR方法快速检测猪鼻拭子样品中产毒素多杀性巴氏杆菌[J]. 汤细彪,吴斌,刘国平,杨明柳,罗勇,卢顺,陈焕春. 畜牧兽医学报. 2007(10)
[7]兔病毒性出血症基因工程疫苗的研究进展[J]. 张夏兰,王红宁,张昌菊,向菁,徐永莉,余协中. 中国预防兽医学报. 2007(10)
[8]猪源多杀性巴氏杆菌的生物学鉴定与荚膜PCR分型[J]. 李永明,罗阿东,徐景峨,袁翠霞. 中国预防兽医学报. 2007(07)
[9]禽巴氏杆菌C48-1株成熟外膜蛋白H基因的原核融合表达[J]. 曹素芳,黄青云,韩先干,陈红英,邓宪方. 中国预防兽医学报. 2006(01)
[10]原核表达的兔出血症病毒衣壳蛋白对兔的免疫保护效果[J]. 王永山,陆承平,周宗安,薛家宾. 中国农业科学. 2004(11)
硕士论文
[1]兔波氏杆菌和巴氏杆菌LAMP快速诊断技术研究[D]. 李科.浙江师范大学 2013
[2]以兔粘液瘤病毒为载体构建兔出血热病毒重组疫苗的研究[D]. 于倩.华中师范大学 2010
[3]兔巴氏杆菌外膜蛋白A基因的克隆、表达和快速诊断方法的建立[D]. 庞安娜.浙江师范大学 2010
本文编号：3105500
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：75 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
RHDV的基因组结构(Abrantesetal2012)
的免疫保护作用（Le Gall-Recule G 2011）。对 RHDV 毒株的核苷酸序列同源性分析比对，将致G1、G2、G3、G4、G5 和 G6 共 6 个基因群(Le G 1997 年，RHDV 遗传进化关系首次被系统性的分不同地域的 RHDV 毒株(Nowotny N et al 1997)。同源性，并将样品分为三个分支，与之前的报道所发生的年份而不是地域进行分支(Oem JK et alt al 2004)。Le Gall 等人在法国毒株中也发现同样三个基因群：G1、G2 和 G3(Le Gall G et al 1998国消失了，取而代之的出现了新的三个基因群：的基因群 G5；G6，基因群 G6 为抗原突变株 1998)。
图 3-1 pSHK5Ts 质粒图谱Fig3-1 Plasmid of pSHK5Ts及酶工具r-Fidelity DNA polymerase，Taq DNA polymerase，D Biotech 公司）；T4-PNK、T4-DNA ligase bufferolymerase，dNTPs，Trans 2K plus DNA marker，Tran司）；质粒小提试剂盒、细菌基因组提取试剂盒、无21
【参考文献】：
期刊论文
[1]兔多杀性巴氏杆菌C51-17株在疫苗效力检验中保存方法的研究[J]. 张媛,李建,张磊,王秀丽,张立春,丁家波. 中国兽药杂志. 2014(03)
[2]检测兔出血症病毒荧光定量方法的建立与应用[J]. 刘行波,原东伟,刘家森,郭冬春,姜骞,林欢,司昌德,崔玉东,曲连东. 黑龙江畜牧兽医. 2013(03)
[3]兔出血症病毒胶体金免疫层析试纸条诊断方法的建立及初步应用[J]. 蔡少平,王芳,贾华敏,张海彬,李超美,范志宇,胡波,熊富强,魏后军. 畜牧兽医学报. 2012(11)
[4]兔出血症病毒RT-PCR检测方法的建立及其临床应用[J]. 胡波,魏后军,王芳,范志宇,徐鹏,徐为中,薛家宾,何孔旺. 畜牧兽医学报. 2010(11)
[5]禽多杀性巴氏杆菌PCR诊断方法的建立[J]. 亓英芳,刘家森,张在平,刘思国,曲连东. 黑龙江畜牧兽医. 2008(07)
[6]应用巢氏PCR方法快速检测猪鼻拭子样品中产毒素多杀性巴氏杆菌[J]. 汤细彪,吴斌,刘国平,杨明柳,罗勇,卢顺,陈焕春. 畜牧兽医学报. 2007(10)
[7]兔病毒性出血症基因工程疫苗的研究进展[J]. 张夏兰,王红宁,张昌菊,向菁,徐永莉,余协中. 中国预防兽医学报. 2007(10)
[8]猪源多杀性巴氏杆菌的生物学鉴定与荚膜PCR分型[J]. 李永明,罗阿东,徐景峨,袁翠霞. 中国预防兽医学报. 2007(07)
[9]禽巴氏杆菌C48-1株成熟外膜蛋白H基因的原核融合表达[J]. 曹素芳,黄青云,韩先干,陈红英,邓宪方. 中国预防兽医学报. 2006(01)
[10]原核表达的兔出血症病毒衣壳蛋白对兔的免疫保护效果[J]. 王永山,陆承平,周宗安,薛家宾. 中国农业科学. 2004(11)
硕士论文
[1]兔波氏杆菌和巴氏杆菌LAMP快速诊断技术研究[D]. 李科.浙江师范大学 2013
[2]以兔粘液瘤病毒为载体构建兔出血热病毒重组疫苗的研究[D]. 于倩.华中师范大学 2010
[3]兔巴氏杆菌外膜蛋白A基因的克隆、表达和快速诊断方法的建立[D]. 庞安娜.浙江师范大学 2010
本文编号：3105500
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