牛卵泡AGTR2序列结构及表达特性分析

发布时间：2021-03-31 14:36

　　【目的】研究牛卵泡发育过程中关键调控蛋白CART的候选受体AGTR2的分子特征和立体结构,并结合AGTR2在不同生理状态牛卵泡的表达特性分析其功能。【方法】同期发情处理后,经B超声波连续监测（每12h一次）采集牛双侧卵巢,分离优势卵泡（dominant follicles, DF）和从属卵泡（subordinate follicles, SF）;其中3头牛DF和SF分别分离颗粒细胞（granulosa cells, GCs）,抽提总RNA后,经反转录、引物特异性扩增、胶回收及测序,获得AGTR2基因全CDS区;生物信息学方法对其序列结构、亲缘关系及立体结构进行分析;设计AGTR2和内参基因RPLP0 qRT-PCR引物,分析AGTR2在牛DF和SF的差异表达情况;另1头牛DF和SF经4%多聚甲醛固定后,设定阳性、阴性对照组和试验组,应用免疫组织化学技术对AGTR2进行表达和定位分析。【结果】AGTR2 CDS区全长1 089 bp,编码362个氨基酸;牛卵泡AGTR2氨基酸序列与NCBI数据库获得的其他24种动物对应的氨基酸序列BLAST分析表明,该序列与印度水牛序列相似性最高（99.... 

【文章来源】：中国农业科学. 2020,53(07)北大核心CSCD

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【部分图文】：

目的片段RT-PCR电泳图

将牛卵泡AGTR2全CDS区序列翻译为氨基酸序列，经NCBI数据库搜索获得其他24种动物对应的氨基酸序列，BLAST分析软件对序列进行比对。结果表明，该序列与印度水牛序列相似性最高（99.4%），与其他动物序列相似性为92.0%—98.9%，表明AGTR2在物种进化过程中保守性较强（图3）。基于不同动物（包括偶蹄类、奇蹄类、鲸鱼、灵长类、食肉类和啮齿类）AGTR2氨基酸序列聚类分析，应用遗传距离邻近法系统发育分析（图4）表明，牛与印度水牛（Bubalus bubalis）遗传距离最近，与野猪（Sus scrofs）遗传距离最远。

由PDB数据库和CDD数据库预测AGTR2立体结构和功能结构域（图5），结果显示：氨基酸序列45—321之间共形成7个平行排列的螺旋结构（图5-A），并7次横跨胞膜；功能域分析也进一步表明7次跨膜结构（7tm）对AGTR2功能的决定作用，是典型的GPCRs（图5-B）。图4 AGTR2氨基酸序列构建系统发生树


本文编号：3111608