孕酮、雌二醇与IFN-τ调控奶牛子宫内膜上皮细胞表达MIC1和BoLA-A的研究
发布时间：2021-03-31 16:08
胚胎在妊娠过程中作为“同种半异体”而不被母体所排斥,主要是通过调控母体与胎儿界面的主要组织相容性复合体（MHC）的时相性表达来实现的。牛的MHC称为牛白细胞抗原（BoLA）。BoLA-I类分子分为典型性和非典型性两类分子。其中BoLA-A属于典型的BoLA-I类分子,能够呈递抗原给相应的T淋巴细胞和巨噬细胞；MIC1属于非典型的BoLA-I类分子,能激活NK细胞的活性。已有研究证明由胚胎滋养层细胞分泌的IFN-τ是反刍动物的妊娠识别信号,能调控BoLA-A和MIC1时相性表达,从而有助于胚胎的识别和妊娠的建立；雌二醇和/或孕酮能刺激胚胎滋养层细胞差异表达IFN-τ。孕酮和雌二醇对BoLA-A和MIC1的调控作用有待研究。因此,研究孕酮和/或雌二醇及其联合IFN-τ对BoLA-A和MIC1的干预作用,有助于从分子通路和功能研究等方面更进一步揭示BoLA-I类分子调节妊娠免疫的分子机制。首先将雌二醇设定3个浓度梯度分别为12.5pg/mL、25pg/mL和50pg/mL,孕酮设定3个浓度梯度分别为2.5ng/mL、5ng/mL和10ng/mL,作用时间设定为3h、6h、12h和24h。不同...
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：77 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略语
1 前言
1.1 主要生殖激素与奶牛妊娠的关系
1.1.1 孕酮与奶牛妊娠
1.1.2 雌激素与奶牛妊娠
1.1.3 雌二醇与孕酮对奶牛妊娠的相互作用
1.2 IFN-τ调节反刍动物妊娠
1.2.1 IFN-τ的基因及蛋白的结构
1.2.2 IFN-τ的受体
1.2.3 IFN-τ抑制ER基因转录的机制
1.2.4 IFN-τ和生殖激素受体的表达
1.2.5 IFN-τ抗黄体溶解作用
1.2.6 IFN-τ的免疫调节功能
1.2.7 IFN-τ对奶牛妊娠的作用
1.3 MHC与妊娠的关系
1.3.1 MHC的发现
1.3.2 MHC-I分子功能
1.3.3 MHC-I分子的结构
1.3.4 典型的MHC-I类分子BoLA-A与妊娠
1.3.5 非典型的MHC-I类分子MIC1与妊娠
1.4 研究目的及意义
1.4.1 研究思路及技术基础
1.4.2 研究目的意义
2 材料与方法
2.1 试验材料
2.1.1 奶牛子宫内膜上皮细胞的采集
2.1.2 主要仪器设备
2.1.3 主要试剂及试剂配制
2.2 试验方法
2.2.1 奶牛子宫内膜上皮细胞体外培养方法
2.2.2 子宫内膜上皮细胞表达BoLA-A和MIC1的E2、P4调节浓度评定
2.2.3 E2、P4和IFN-τ作用于子宫内膜上皮细胞
2.2.4 实时荧光定量PCR
2.2.5 细胞蛋白的提取及MIC1和BoLA-A蛋白测定-Western Blot分析
2.2.6 统计分析
3 结果与分析
3.1 细胞培养、鉴定及扩倍
3.1.1 细胞原代培养与鉴定
3.1.2 细胞扩倍
3.2 细胞总RNA提取及鉴定
3.3 cDNA合成及MIC1和BoLA-A鉴定
3.4 MIC1和BoLA-A表达量
3.4.1 扩增产物质量
3.4.2 扩增特异性
3.4.3 数据结果的分析处理
3.5 MIC1和BoLA-A蛋白的表达情况
4 讨论
4.1 主要生殖激素对妊娠的调节作用
4.2 E2、P4调节奶牛子宫上皮细胞MIC1和BoLA-A基因表达
4.3 IFN-τ调节奶牛子宫上皮细胞MIC1和BoLA-A基因表达
4.4 IFN-τ与E2、P4联合调节奶牛子宫上皮细胞MIC1和BoLA-A基因表达
5 结论
参考文献
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]生殖激素在奶牛繁殖中的应用[J]. 刘书印. 当代畜牧. 2008(10)
[2]沼泽型水牛发情周期生殖激素变化的研究[J]. 刘瑞鑫,蒋如明,韦英明. 广东畜牧兽医科技. 2008(04)
硕士论文
[1]IFN-τ调控奶牛子宫上皮细胞表达MICB及BoLA-A的研究[D]. 吴岳.华中农业大学 2012
本文编号：3111712
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：77 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略语
1 前言
1.1 主要生殖激素与奶牛妊娠的关系
1.1.1 孕酮与奶牛妊娠
1.1.2 雌激素与奶牛妊娠
1.1.3 雌二醇与孕酮对奶牛妊娠的相互作用
1.2 IFN-τ调节反刍动物妊娠
1.2.1 IFN-τ的基因及蛋白的结构
1.2.2 IFN-τ的受体
1.2.3 IFN-τ抑制ER基因转录的机制
1.2.4 IFN-τ和生殖激素受体的表达
1.2.5 IFN-τ抗黄体溶解作用
1.2.6 IFN-τ的免疫调节功能
1.2.7 IFN-τ对奶牛妊娠的作用
1.3 MHC与妊娠的关系
1.3.1 MHC的发现
1.3.2 MHC-I分子功能
1.3.3 MHC-I分子的结构
1.3.4 典型的MHC-I类分子BoLA-A与妊娠
1.3.5 非典型的MHC-I类分子MIC1与妊娠
1.4 研究目的及意义
1.4.1 研究思路及技术基础
1.4.2 研究目的意义
2 材料与方法
2.1 试验材料
2.1.1 奶牛子宫内膜上皮细胞的采集
2.1.2 主要仪器设备
2.1.3 主要试剂及试剂配制
2.2 试验方法
2.2.1 奶牛子宫内膜上皮细胞体外培养方法
2.2.2 子宫内膜上皮细胞表达BoLA-A和MIC1的E2、P4调节浓度评定
2.2.3 E2、P4和IFN-τ作用于子宫内膜上皮细胞
2.2.4 实时荧光定量PCR
2.2.5 细胞蛋白的提取及MIC1和BoLA-A蛋白测定-Western Blot分析
2.2.6 统计分析
3 结果与分析
3.1 细胞培养、鉴定及扩倍
3.1.1 细胞原代培养与鉴定
3.1.2 细胞扩倍
3.2 细胞总RNA提取及鉴定
3.3 cDNA合成及MIC1和BoLA-A鉴定
3.4 MIC1和BoLA-A表达量
3.4.1 扩增产物质量
3.4.2 扩增特异性
3.4.3 数据结果的分析处理
3.5 MIC1和BoLA-A蛋白的表达情况
4 讨论
4.1 主要生殖激素对妊娠的调节作用
4.2 E2、P4调节奶牛子宫上皮细胞MIC1和BoLA-A基因表达
4.3 IFN-τ调节奶牛子宫上皮细胞MIC1和BoLA-A基因表达
4.4 IFN-τ与E2、P4联合调节奶牛子宫上皮细胞MIC1和BoLA-A基因表达
5 结论
参考文献
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]生殖激素在奶牛繁殖中的应用[J]. 刘书印. 当代畜牧. 2008(10)
[2]沼泽型水牛发情周期生殖激素变化的研究[J]. 刘瑞鑫,蒋如明,韦英明. 广东畜牧兽医科技. 2008(04)
硕士论文
[1]IFN-τ调控奶牛子宫上皮细胞表达MICB及BoLA-A的研究[D]. 吴岳.华中农业大学 2012
本文编号：3111712
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