大熊猫轮状病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与初步应用
发布时间：2021-04-02 03:43
大熊猫（Ailuropoda melanoleuca）属于我国独有且濒危珍稀的野生物种,受制于大面积栖息地碎片化和隔离小种群导致无法自然繁殖,大熊猫迁地保护工作因此尤为重要。大熊猫轮状病毒（Giant Panda Rotavirus,GPRV）感染常引起幼兽的腹泻,甚至死亡,是一种严重危害大熊猫迁地保护的疾病。轮状病毒诊断方法多样,各具优缺点,对于发生腹泻性疾病的大熊猫而言,快速且准确的区分是否轮状病毒感染所致,能为临床处置赢得宝贵的时间和提供方向性指导。近年来,实时荧光定量PCR技术（Real-time Fuorescence Quantitative PCR,qPCR）在人类重大公共卫生疫病的诊断中发挥了重大作用,被认为是极其高效的诊断方法。本研究依据GenBank中登录的GPRV VP4基因序列设计1对引物,通过对引物浓度、退火温度和循环数的优化,绘制标准曲线,建立一种能快速准确定量检测样品中的GPRV实时荧光定量RT-PCR检测方法,使本方法敏感度达1.0×100拷贝/μL;同时通过对重组质粒各稀释度核酸样品进行常规RT-PCR检测,其敏感度可达1.0×1...
【文章来源】：四川农业大学四川省 211工程院校
【文章页数】：50 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
GPRV目的片断PCR扩增Fig.2-1ThetargetgeneofGPRVamplificationsbyPCR
实时荧光定量RT-PCR对不同浓度质粒的检测
以该试验优化的条件进行实时荧光定量RT-PCR反应并绘制标准曲线，横坐标为不同稀释度的标准阳性模板的对数，纵坐标为实时荧光定量RT-PCR 反应过程中出现荧光信号的初始循环数Cq（图2-3）。标准曲线的直线方程为：y=-3.142x+52.254。结果显示实时荧光定量RT-PCR在6.4×1013拷贝/μL~6.4×109拷贝/μL范围内，r2=0.999，具有良好的线性关系。图 2-3 标准曲线Fig.2-3 The standard curve
本文编号：3114518
【文章来源】：四川农业大学四川省 211工程院校
【文章页数】：50 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
GPRV目的片断PCR扩增Fig.2-1ThetargetgeneofGPRVamplificationsbyPCR
实时荧光定量RT-PCR对不同浓度质粒的检测
以该试验优化的条件进行实时荧光定量RT-PCR反应并绘制标准曲线，横坐标为不同稀释度的标准阳性模板的对数，纵坐标为实时荧光定量RT-PCR 反应过程中出现荧光信号的初始循环数Cq（图2-3）。标准曲线的直线方程为：y=-3.142x+52.254。结果显示实时荧光定量RT-PCR在6.4×1013拷贝/μL~6.4×109拷贝/μL范围内，r2=0.999，具有良好的线性关系。图 2-3 标准曲线Fig.2-3 The standard curve
本文编号：3114518
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