牛无浆体和山羊无浆体双重PCR检测方法的建立

发布时间：2021-04-04 05:18

　　无浆体是一种专性血液寄生的可经硬蜱传播的病原体,世界范围内分布广泛。本研究旨在建立一种可以同时检测牛无浆体和山羊无浆体的双重PCR方法。通过对2种病原gltA基因和msp4基因位点引物的筛选,PCR反应体系中引物剂量、酶剂量和PCR反应条件中的退火温度、循环次数的优化,最终确定了一个引物组合和最适的PCR反应体系和条件,并对其进行了重复性和特异性验证。结果表明,本研究建立的双重PCR方法有效,操作简便、特异性、重复性良好,为兽医工作者和科研人员提供了一种山羊无浆体和牛无浆体感染快速鉴别诊断和流行病学监测工具。 

【文章来源】：畜牧与兽医. 2020,52(07)北大核心

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

不同退火温度的PCR扩增

单独用山羊无浆体引物(acmsp4f4/acmsp4r4)扩增阳性山羊无浆体阳性样品,琼脂糖凝胶电泳结果显示在约641 bp处出现条带,大小与预期目的片段大小相符(图2)。图2 PCR扩增结果

图1 PCR扩增结果同时采用牛无浆体引物abgltAf1/abgltAr1和山羊无浆体引物acmsp4f4/acmsp4r4两套引物进行PCR扩增,结果显示得到2条特异性条带,其中一条特异性条带约133 bp,另一条约641 bp,与预期目的片段大小相符(图3)。

【参考文献】：
期刊论文
[1]奶牛四种蜱虫病的临床症状、鉴别诊断及治疗[J]. 孙忠涛.  现代畜牧科技. 2019(01)
[2]山羊无浆体16S rRNA、MSP4和GroEL（HSP60）基因的克隆测序及分析[J]. 周作勇,王芝英,胡世君,彭开政,聂奎.  中国兽医学报. 2014(03)
[3]实时荧光PCR检测牛边缘无浆体方法的建立及应用[J]. 王贵强,李树清,张子群,陈志飞,由轩,王巧全,杜凯,姚宝安.  中国预防兽医学报. 2007(08)

硕士论文
[1]羊吕氏泰勒虫与嗜吞噬细胞无浆体双重PCR检测方法的建立与应用[D]. 闫亚群.河南农业大学 2018



本文编号：3117800