非洲猪瘟病毒P30蛋白单克隆抗体的制备与应用

发布时间：2021-04-04 19:07

　　为研发非洲猪瘟病毒（ASFV）的免疫学诊断试剂,利用大肠杆菌表达系统表达重组ASFV P30蛋白,制备并鉴定P30蛋白单克隆抗体,建立检测ASFV的胶体金免疫层析法（GICA）。结果显示,成功构建了重组表达质粒pET28a-P30,实现了重组P30蛋白的可溶性表达,且该重组蛋白与ASFV阳性血清可发生特异性反应;制备了10株稳定分泌P30蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,腹水ELISA效价均高于1∶40 000,与ASFV具有良好的反应性,且不与其他常见猪源病毒反应;利用2株单克隆抗体建立胶体金免疫层析法,可用于ASFV的检测。 

【文章来源】：河南农业科学. 2020,49(10)北大核心

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

pET28a-P30双酶切鉴定结果

SDS-PAGE鉴定结果(图2)表明,菌种在IPTG诱导后可表达出重组P30蛋白,且表达的重组蛋白主要存在于上清中,大小约30 ku,与预期结果一致。2.3 重组P30蛋白的纯化与Western blot鉴定

采用Ni2+亲和层析法纯化上清中的可溶性重组P30蛋白。SDS-PAGE鉴定及光谱扫描结果表明,纯化后目的蛋白纯度约为83%(图3A)。Western blot结果显示,重组P30蛋白与ASFV阳性血清反应可见特异性的阳性反应条带(图3B)。表明重组P30蛋白具有良好的反应性。2.4 P30蛋白免疫小鼠血清ELISA效价测定

【参考文献】：
期刊论文
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[2]基于金纳米颗粒标记非洲猪瘟病毒p30蛋白免疫层析检测方法的建立[J]. 孙燕燕,赵亚茹,李昕,杨吉飞,牛庆丽,林密,王兆贵,刘猛,关贵全,殷宏,蒋韬,刘志杰.  中国兽医科学. 2020(08)
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博士论文
[1]基于非洲猪瘟病毒P54蛋白抗原表位的ELISA检测方法建立及应用[D]. 曹琛福.华南农业大学 2016

硕士论文
[1]非洲猪瘟病毒p30重组蛋白的表达及单克隆抗体制备[D]. 储德文.扬州大学 2013



本文编号：3118317