马立克病毒新ORF的鉴定

发布时间：2021-04-06 05:07

　　马立克病（Marek’s disease, MD）是由马立克病病毒（Marek’s disease virus, MDV）引起的以单核细胞浸润为特征并诱发各个器官出现淋巴瘤的高度传染性疾病,并造成免疫抑制,引起继发感染,给养鸡业造成巨大的经济损失。随着MDV-1多个毒株基因全序列测序完成,人们对MDV-1的生物学特性有了进一步了解,同时推测出新的开放阅读框（Open Read Frame, ORF）,为从分子水平研究MDV的生物学特性拓宽道路。本论文以CVI988/Rispens基因组为基础着重鉴定部分MDV-1特有的新ORF是否为蛋白编码基因,为研究马立克病毒致病机制、致瘤机制、毒力致弱机制及其疫苗免疫机制等奠定基础。从推测的70个新ORF中选择能编码大于100aa的MDV-1特有的新ORF,有ORF1.0/ORF80.0、ORF5.6/ORF75.9、ORF89.5、ORF91.5和ORF97.3复合要求,通过DNAstar软件进行抗原性分析并设计引物扩增选定的新ORF。通过RT-PCR方法初步筛选能在接毒CVI988/Rispens的鸡胚成纤维细胞（Chicken Embryo ... 

【文章来源】：四川农业大学四川省 211工程院校

【文章页数】：70 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
Abstract
英文缩略表
目录
第一章 文献综述及选题目的和意义
    1 马立克病研究进展
        1.1 病原学
            1.1.1 病毒形态
            1.1.2 血清型分型
            1.1.3 MDV理化性质
        1.2 马立克病毒基因组的研究进展
            1.2.1 全基因测序情况
            1.2.2 已经鉴定的主要基因及其编码蛋白的基本功能
            1.2.3 MDV-1强弱毒株之间的主要差异性基因
        1.3 流行病学和致病机理
            1.3.1 流行病学
            1.3.2 致病机理
        1.4 临床症状、病理变化及疾病的诊断与防控
            1.4.1 临床症状
            1.4.2 病理变化
            1.4.3 疾病的诊断与防控
    2 选题的目的及意义
第二章 试验部分
    1 实验材料
        1.1 鸡胚和实验动物
        1.2 病毒、宿主菌及菌体
        1.3 主要仪器
        1.4 主要试剂
        1.5 试剂配制
    2 实验方法
        2.1 新ORF初步筛选及引物设计
        2.2 CVI988/Rispens复苏及病毒PFU的测定
            2.2.1 CEF的制备
            2.2.2 复苏CVI988/Rispens
            2.2.3 PFU的测定
        2.3 新ORF基因的初步鉴定
            2.3.1 总RNA的提取
            2.3.2 总RNA反转录为cNDA
            2.3.3 PCR反应
        2.4 新ORF的克隆测序
            2.4.1 胶回收
            2.4.2 克隆载体的构建及测序
        2.5 新ORF的原核表达
            2.5.1 表达载体的构建
            2.5.2 表达重组菌的构建及表达条件的筛选
            2.5.3 大量表达及纯化
        2.6 兔抗重组目的蛋白和鸡抗CVI988/Rispens高免血清的制备
            2.6.1 兔抗重组目的蛋白高免血清的制备
            2.6.2 鸡抗CVI988/Rispens高免血清蛋白的制备
        2.7 间接免疫荧光
        2.8 Western-blot检测新ORF在鸡体中的免疫原性
        2.9 RT-PCR方法检测ORF5.6/75.9和ORF97.3在鸡体的转录情况
    3 实验结果
        3.1 CVI988/Rispens复苏结果及PFU测定
        3.2 RNA质量检测及RT-PCR结果
        3.3 新ORF基因克隆测序和表达载体构建结果
        3.4 表达重组菌诱导条件筛选及目的蛋白的纯化结果
        3.5 间接免疫荧光
        3.6 Western-blot结果
        3.7 ORF5.6/ORF75.9和ORF97.3基因在鸡体中的转录情况检测
    4 讨论
        4.1 新ORF的初步筛选
        4.2 RT-PCR、间接免疫荧光和Western-blot方法
        4.3 三个新ORF的鉴定情况
        4.4 MDV-1具有免疫原性的蛋白
        4.5 MDV-1重复长区
        4.6 新ORF生物信息学
结论
参考文献
致谢
作者简介及攻读硕士学位期间发表的学术论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]MDV新疆株的分离和鉴定[J]. 罗朋,田建龙,热合木江·达吾提,李金平.  新疆畜牧业. 2009(01)
[2]鸡眼型大肠杆菌与马立克氏病混合感染的诊治[J]. 田新玲.  新疆农垦科技. 2007(04)
[3]鸡马立克氏病发生的新特点与防治措施[J]. 郑禄生.  福建畜牧兽医. 2007(01)
[4]鸡三种肿瘤病在广西的流行病学研究[J]. 王桂军,韦平,何秀苗,李康然,熊丽文,杨乐,磨美兰,陶锦华.  中国家禽. 2002(10)
[5]禽白血病及禽网状内皮细胞增生病感染情况的调查[J]. 崔治中,朱承如,孙怀昌.  中国畜禽传染病. 1987(01)

硕士论文
[1]马立克氏病毒“814”疫苗株全基因组序列测定及分析[D]. 张锋.中国农业科学院 2010



本文编号：3120822