几种非洲猪瘟蛋白的筛选表达及纯化
发布时间：2021-04-06 20:20
非洲猪瘟病毒（African swine fever virus,ASFV）感染猪科动物可以引起非洲猪瘟（African swine fever,ASF）。ASF是一种急热高度接触性传染病。病程短,发病死亡率高,家猪感染十天内病死率接近100%。我国辽宁省沈阳市于2018年8月发现首例非洲猪瘟病例。非洲猪瘟病毒在国内的蔓延对生猪养殖业、猪肉产品贸易及相关领域造成较为严重的经济冲击,但目前尚无有效商品化疫苗问世。ASFV基因编码150-200种蛋白质,其中约一半的ASFV蛋白功能尚不清楚,蛋白结构的解析对研究蛋白功能,作用结合位点,以及相关疫苗药物的开发,均有重要意义。目前大多数的ASFV蛋白的结构信息尚未可知,截至2020年5月PDB数据库显示八种ASFV蛋白（p B119L、A179L、A238L、NP419L、p A104R、p S273R、E165R、B646L）的三十余种形态被解析,其中半数以上的蛋白结构为近一年的研究结果。本课题利用荧光检测分子筛（FSEC）技术对ASFV推测具有较为关键功能的蛋白CP123L、X69R、EP152R、E199L、E66L、E183L、I329...
【文章来源】：哈尔滨工业大学黑龙江省 211工程院校 985工程院校
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
非洲猪瘟病毒的跨大陆传播及病毒分布[7]
哈尔滨工业大学工学硕士学位论文-4-病毒外围的双层囊膜保护，ASFV病毒粒子具有非常高的稳定性，自然状态下有很强的生存能力，在pH3.9-11.5的条件下，病毒活力不受影响。-70℃冷藏条件下，脾脏组织内2年内，血液中18个月内，病毒的感染能力均不受影响。温度持续70℃高温30分钟可将病毒完全杀死[21]。病毒粒子表面囊膜对酚氯、乙醚等有机溶剂敏感，常规次氯酸盐、福尔马林等消毒剂均可使病毒灭活。图1-2非洲猪瘟病毒颗粒结构[19]利用冷冻电镜对纯化的病毒颗粒进行结构解析，进一步解释了ASFV衣壳的组装模式。五邻体复合物与p17、p49和M1249L三种次要衣壳蛋白形成的复杂网络，可以维持和保证整个衣壳的稳定。p49与膜结合介导五邻体复合物附着在内膜上并招募壳粒形成核心，继而启动组装。骨架蛋白M1249L附着在五邻体核心上，构建病毒骨架，确定颗粒尺寸，同时与p17、五邻体核心一样，可以在内膜移动以完成更高阶的组装。在p17介导下壳粒、M1249L和p17形成拉链结构，连接相邻的五邻体核心构建多面体框架。p72在病毒表面形成同源三聚体，三聚体通过双果冻卷（doublejelly-roll）的结构构成伪六聚体p72壳粒[19]，其结构对基于抗原表位的免疫原设计，和ASFV疫苗的研发提供重要依据。1.2.3疫苗研究进展疫苗的开发策略基本上可以分为以下几大类：传统灭活病毒疫苗、减毒活
哈尔滨工业大学工学硕士学位论文-7-图1-3非洲猪瘟病毒编码蛋白分布示意图[36]1.3.2ASFV编码复制修饰转录相关蛋白除占比24%的ASFV基因组编码的结构蛋白外，19%的ASFV基因组用来编码mRNA转录因子和修饰酶[36]，特殊的转录机制使ASFV能够独立于宿主细胞进行转录，依赖性相对较低，保证严格的时控调节，使得基因准确表达。ASFV基因组编码与mRNA合成相关的RNA聚合酶亚基主要包括D339L、NP1450L(RP1)、EP1242L(RP2)、H359L(RP3)、D205R(RP5)和C147L(RP6)。ASFV基因组编码的mRNA修饰酶包括加帽酶pNP868R、甲基转移酶pEP424R和多腺苷二磷酸核糖聚合酶pC475L等[42]。还有转录因子pG1340L
【参考文献】：
期刊论文
[1]非洲猪瘟病原学和流行病学研究新进展[J]. 史喜菊,刘环,窦树龙,林茜茜. 中国动物检疫. 2020(05)
[2]猪圆环病毒2型Cap蛋白原核表达载体的构建、表达及蛋白纯化[J]. 刘玉伟,辛长勋,孙盼盼,王硕,高梅,时建立,彭喆,吴晓燕,王永明,李俊. 黑龙江畜牧兽医. 2019(24)
[3]非洲猪瘟病毒的生物学特性与疫苗研制的难点[J]. 雷建林,曹宏,杨丽霞,李茜,王应强. 生物工程学报. 2020(01)
[4]非洲猪瘟病毒基因缺失疫苗株的构建和免疫保护特性[J]. 张艳艳,陈腾,张静远,齐宇,缪发明,薄宗义,王立冬,郭晓宇,周鑫韬,杨金梅,王晓虎,高玉龙,汪春雨,鲍晨沂,米立娟,孙雪霏,冯娜,杨金金,王承宇,万忠海,李记平,孟轲音,田多,李楠,王述超,王颖,张菲,张锦霞,蒋依倩,刘晔,张守峰,张中洋,钱莺娟,朱鸿飞,高玉伟,陈鸿军,李金祥,扈荣良. 中国兽医学报. 2019(08)
[5]非洲猪瘟病毒多表位融合蛋白P72的构建、表达及免疫学特性研究[J]. 郭晶,李重阳,孟庆玲,乔军,伍晔晖,王立霞,马帅,才学鹏. 家畜生态学报. 2019(06)
[6]非洲猪瘟病毒免疫学及疫苗研究进展[J]. 张洪亮,金铭,赵越,王凤雪,马晶,温永俊,单虎. 病毒学报. 2019(03)
[7]非洲猪瘟病毒编码蛋白功能研究进展[J]. 王晓丽,孙蕾,刘文军,商营利. 微生物学通报. 2019(07)
[8]非洲猪瘟防控及疫苗研发:挑战与对策[J]. 王涛,孙元,罗玉子,仇华吉. 生物工程学报. 2018(12)
[9]非洲猪瘟病毒免疫逃逸相关蛋白研究进展[J]. 王西西,陈青,陈鸿军,朱鸿飞,李金祥,郭晓宇. 病毒学报. 2018(06)
[10]我国首例非洲猪瘟的确诊[J]. 王清华,任炜杰,包静月,戈胜强,李金明,李林,樊晓旭,刘春菊,王华,张永强,徐天刚,段亚良,顾贵波,周晨阳,吴晓东. 中国动物检疫. 2018(09)
博士论文
[1]非洲猪瘟病毒蛋白对cGAS-STING信号通路抑制作用研究[D]. 王西西.中国农业科学院 2019
硕士论文
[1]非洲猪瘟病毒免疫抑制基因的筛选及RPA检测方法的初步建立[D]. 吴映彤.中国农业科学院 2019
[2]非洲猪瘟病毒无标签重组p54、B602L抗原的制备与应用[D]. 张晓凯.扬州大学 2019
[3]一、通过使用MBP标签高水平原核表达纯化死亡结构域家族蛋白 二、炎症小体NLRP1与ASC的结构生物学研究[D]. 房康.中国科学技术大学 2018
[4]非洲猪瘟病毒VP73蛋白的原核表达纯化及单克隆抗体的制备与鉴定[D]. 陈轶.内蒙古农业大学 2012
本文编号：3122073
【文章来源】：哈尔滨工业大学黑龙江省 211工程院校 985工程院校
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
非洲猪瘟病毒的跨大陆传播及病毒分布[7]
哈尔滨工业大学工学硕士学位论文-4-病毒外围的双层囊膜保护，ASFV病毒粒子具有非常高的稳定性，自然状态下有很强的生存能力，在pH3.9-11.5的条件下，病毒活力不受影响。-70℃冷藏条件下，脾脏组织内2年内，血液中18个月内，病毒的感染能力均不受影响。温度持续70℃高温30分钟可将病毒完全杀死[21]。病毒粒子表面囊膜对酚氯、乙醚等有机溶剂敏感，常规次氯酸盐、福尔马林等消毒剂均可使病毒灭活。图1-2非洲猪瘟病毒颗粒结构[19]利用冷冻电镜对纯化的病毒颗粒进行结构解析，进一步解释了ASFV衣壳的组装模式。五邻体复合物与p17、p49和M1249L三种次要衣壳蛋白形成的复杂网络，可以维持和保证整个衣壳的稳定。p49与膜结合介导五邻体复合物附着在内膜上并招募壳粒形成核心，继而启动组装。骨架蛋白M1249L附着在五邻体核心上，构建病毒骨架，确定颗粒尺寸，同时与p17、五邻体核心一样，可以在内膜移动以完成更高阶的组装。在p17介导下壳粒、M1249L和p17形成拉链结构，连接相邻的五邻体核心构建多面体框架。p72在病毒表面形成同源三聚体，三聚体通过双果冻卷（doublejelly-roll）的结构构成伪六聚体p72壳粒[19]，其结构对基于抗原表位的免疫原设计，和ASFV疫苗的研发提供重要依据。1.2.3疫苗研究进展疫苗的开发策略基本上可以分为以下几大类：传统灭活病毒疫苗、减毒活
哈尔滨工业大学工学硕士学位论文-7-图1-3非洲猪瘟病毒编码蛋白分布示意图[36]1.3.2ASFV编码复制修饰转录相关蛋白除占比24%的ASFV基因组编码的结构蛋白外，19%的ASFV基因组用来编码mRNA转录因子和修饰酶[36]，特殊的转录机制使ASFV能够独立于宿主细胞进行转录，依赖性相对较低，保证严格的时控调节，使得基因准确表达。ASFV基因组编码与mRNA合成相关的RNA聚合酶亚基主要包括D339L、NP1450L(RP1)、EP1242L(RP2)、H359L(RP3)、D205R(RP5)和C147L(RP6)。ASFV基因组编码的mRNA修饰酶包括加帽酶pNP868R、甲基转移酶pEP424R和多腺苷二磷酸核糖聚合酶pC475L等[42]。还有转录因子pG1340L
【参考文献】：
期刊论文
[1]非洲猪瘟病原学和流行病学研究新进展[J]. 史喜菊,刘环,窦树龙,林茜茜. 中国动物检疫. 2020(05)
[2]猪圆环病毒2型Cap蛋白原核表达载体的构建、表达及蛋白纯化[J]. 刘玉伟,辛长勋,孙盼盼,王硕,高梅,时建立,彭喆,吴晓燕,王永明,李俊. 黑龙江畜牧兽医. 2019(24)
[3]非洲猪瘟病毒的生物学特性与疫苗研制的难点[J]. 雷建林,曹宏,杨丽霞,李茜,王应强. 生物工程学报. 2020(01)
[4]非洲猪瘟病毒基因缺失疫苗株的构建和免疫保护特性[J]. 张艳艳,陈腾,张静远,齐宇,缪发明,薄宗义,王立冬,郭晓宇,周鑫韬,杨金梅,王晓虎,高玉龙,汪春雨,鲍晨沂,米立娟,孙雪霏,冯娜,杨金金,王承宇,万忠海,李记平,孟轲音,田多,李楠,王述超,王颖,张菲,张锦霞,蒋依倩,刘晔,张守峰,张中洋,钱莺娟,朱鸿飞,高玉伟,陈鸿军,李金祥,扈荣良. 中国兽医学报. 2019(08)
[5]非洲猪瘟病毒多表位融合蛋白P72的构建、表达及免疫学特性研究[J]. 郭晶,李重阳,孟庆玲,乔军,伍晔晖,王立霞,马帅,才学鹏. 家畜生态学报. 2019(06)
[6]非洲猪瘟病毒免疫学及疫苗研究进展[J]. 张洪亮,金铭,赵越,王凤雪,马晶,温永俊,单虎. 病毒学报. 2019(03)
[7]非洲猪瘟病毒编码蛋白功能研究进展[J]. 王晓丽,孙蕾,刘文军,商营利. 微生物学通报. 2019(07)
[8]非洲猪瘟防控及疫苗研发:挑战与对策[J]. 王涛,孙元,罗玉子,仇华吉. 生物工程学报. 2018(12)
[9]非洲猪瘟病毒免疫逃逸相关蛋白研究进展[J]. 王西西,陈青,陈鸿军,朱鸿飞,李金祥,郭晓宇. 病毒学报. 2018(06)
[10]我国首例非洲猪瘟的确诊[J]. 王清华,任炜杰,包静月,戈胜强,李金明,李林,樊晓旭,刘春菊,王华,张永强,徐天刚,段亚良,顾贵波,周晨阳,吴晓东. 中国动物检疫. 2018(09)
博士论文
[1]非洲猪瘟病毒蛋白对cGAS-STING信号通路抑制作用研究[D]. 王西西.中国农业科学院 2019
硕士论文
[1]非洲猪瘟病毒免疫抑制基因的筛选及RPA检测方法的初步建立[D]. 吴映彤.中国农业科学院 2019
[2]非洲猪瘟病毒无标签重组p54、B602L抗原的制备与应用[D]. 张晓凯.扬州大学 2019
[3]一、通过使用MBP标签高水平原核表达纯化死亡结构域家族蛋白 二、炎症小体NLRP1与ASC的结构生物学研究[D]. 房康.中国科学技术大学 2018
[4]非洲猪瘟病毒VP73蛋白的原核表达纯化及单克隆抗体的制备与鉴定[D]. 陈轶.内蒙古农业大学 2012
本文编号：3122073
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