氧化应激介导达氟沙星诱导LLC-PK1细胞损伤的机制研究

发布时间：2021-04-07 06:41

　　氟喹诺酮类药物因其广谱抗菌活性和较好的组织渗透性,广泛应用于系统性感染,尤其是用于治疗呼吸系统和泌尿系统感染。FQs的毒性在临床上存在中枢神经系统不良反应、胃肠道毒性、光敏反应、软骨毒性及肾脏毒性等。该类药物产生的许多毒性都与氧化应激具有一定的关系。肾毒性是FQs引起的潜在的、严重的毒性,但是肾毒性是否也与氧化应激有关还不是很清楚。本试验选择猪近端肾小管上皮细胞（LLC-PK1）为研究模型,研究了动物专用FQs达氟沙星诱导肾损伤的机制,为临床合理使用FQs并降低其引起的中毒性肾损伤提供一定的指导意义。通过细胞形态学观察,细胞增殖抑制检测,凋亡率检测,初步研究达氟沙星对LLC-PK1细胞的毒作用。然后通过检测细胞内活性氧ROS、脂质过氧化物MDA,抗氧化酶SOD、CAT及GSH-PX的影响来探究达氟沙星对LLC-PK1细胞氧化还原系统的影响。另外,通过抗氧化剂GSH和NAC的预孵育作用,检测抗氧化剂对达氟沙星诱导的LLC-PK1细胞毒性的保护作用。结果显示,达氟沙星呈时间和剂量依赖性诱发体外培养的LLC-PK1细胞增值抑制,但是只有400μM孵育48h才对细胞产生较大程度的凋亡,凋亡率为... 

【文章来源】：湖南农业大学湖南省

【文章页数】：55 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 立项依据
    1.2 氟喹诺酮类药物的研究进展
        1.2.1 氟喹诺酮类药物的性质
        1.2.2 氟喹诺酮类药物的应用
        1.2.3 达氟沙星
        1.2.4 氟喹诺酮类药物的耐药性
        1.2.5 氟喹诺酮类药物的毒性
    1.3 氧化应激与毒性
        1.3.1 机体氧化还原系统
        1.3.2 氧化应激诱导细胞凋亡机制
        1.3.3 氟喹诺酮类药物毒性与氧化应激的关系
2 材料与方法
    2.1 主要试剂及仪器设备
        2.1.1 细胞
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 主要仪器
        2.1.4 主要试剂配制
    2.2 达氟沙星对LLC-PK1细胞毒性研究
        2.2.1 LLC-PK1细胞的培养
        2.2.2 细胞形态学观察
        2.2.3 MTT法检测LLC-PK1细胞活力
        2.2.4 荧光探针DCFH-DA法检测LLC-PK1细胞ROS含量
        2.2.5 LLC-PK1细胞脂质过氧化物（MDA）的检测
        2.2.6 LLC-PK1细胞抗氧化酶SOD、GSH-PX及CAT活力检测
        2.2.7 流式细胞术检测达氟沙星诱导LLC-PK1细胞凋亡
3 结果
    3.1 达氟沙星对LLC-PK1细胞形态上影响
    3.2 达氟沙星对LLC-PK1细胞活力的影响
    3.3 荧光探针DCFH-DA法检测达氟沙星诱导LLC-PK1细胞ROS的产生
    3.4 达氟沙星对LLC-PK1细胞脂质过氧化物（MDA）的影响
    3.5 达氟沙星对LLC-PK1细胞内超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肤过氧化物酶（GSH-PX）、过氧化氢酶（CAT）的影响
    3.6 含硫基类抗氧化剂对LLC-PK1细胞抗氧化酶的保护作用
    3.7 流式细胞术检测达氟沙星诱导LLC-PK1细胞凋亡
4 讨论
    4.1 ROS介导达氟沙星诱导LLC-PK1细胞毒性
    4.2 抗氧化酶对达氟沙星诱导细胞毒性的保护作用
5 结论
参考文献
附录
致谢
作者简介


【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3122990