延边奶山羊耳成纤维细胞转染人血清白蛋白基因转染条件的优化

发布时间：2021-04-09 21:49

　　本研究利用含有HSA和Neo基因的乳腺特异性表达载体pBC1-HSA转染延边奶山羊耳成纤维细胞,经G418筛选后获得转基因细胞,继续培养、传代后进行PCR鉴定,检验目的基因是否成功整合。由于不同细胞的脂质体转染的最佳条件不同,为获得最高的转染效率,本试验通过质粒DNA的量、脂质体的量和细胞暴露DNA-脂质体复合物的时间三个方面来优化转染条件。最后,通过细胞转基因前后的生长曲线和核型,比较分析转基因对成纤维细胞的影响。得到试验结果如下：1、通过组织块贴壁培养法,成功获得廷边奶山羊耳部成纤维细胞。观察细胞形态及生长速度,对细胞进行生长曲线和核型分析,可知4-13代细胞生长状态良好,可用于转基因试验。2、延边奶山羊耳成纤维细胞对G418的最小致死浓度为600μg/ml,筛选时使用浓度为700μg/ml,维持筛选浓度为350μg/ml。3、适宜代数的延边奶山羊耳成纤维细胞,利用LipofectamineTM2000转染pBC1-HSA,24孔细胞培养板的最佳转染条件为质粒DNA的量为0.8μg、LipofectamineTM2000的量为2.0μl、最佳转染时间为6h,获得最高的转染效率为12... 

【文章来源】：延边大学吉林省 211工程院校

【文章页数】：54 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 前言
    1.1 动物转基因技术
    1.2 细胞转染技术的研究进展
    1.3 HSA的研究进展
    1.4 试验目的及研究意义
第二章 材料与方法
    2.1 试验材料与仪器
    2.2 试验方法
第三章 结果与分析
    3.1 延边奶山羊耳成纤维细胞原代细胞与其他代数细胞生长状态的观察
    3.2 一次性细胞培养瓶与重复利用细胞培养瓶贴壁率的比较
    3.3 延边奶山羊耳成纤维细胞对G418最小致死剂量的测定
    3.4 转染用质粒DNA的制备
TM 2000对细胞存活率的影响">    3.5 Lipofectamine^TM 2000对细胞存活率的影响
    3.6 延边奶山羊耳成纤维细胞转染条件的优化
    3.7 稳定转染细胞系的PCR检测
    3.8 细胞转基因前后生长曲线的绘制
    3.9 细胞转基因前后的核型分析
第四章 讨论
    4.1 廷边奶山羊耳成纤维细胞的培养
    4.2 延边奶山羊耳成纤维细胞的转染及鉴定
    4.3 G418筛选及培养中存在的问题
    4.4 转基因前后细胞生长曲线的比较
    4.5 转基因前后延边奶山羊耳成纤维细胞的核型分析
第五章 结论
致谢
参考文献
附录
    论文发表情况
附件



本文编号：3128373