新型三源重组H1N1亚型猪流感病毒分子致病机制解析
发布时间：2021-04-11 14:48
猪流感病毒（swine influenza virus,SIV）是由8条单股、负链RNA组成,属于正黏病毒科。目前国内猪群中SIV主要流行亚型为H1N1、H1N2和H3N2,其中三源重组H1N1亚型SIV是重要的流行毒株之一。前期研究数据表明:与欧洲类禽H1N1亚型SIV（A/Swine/Tianjin/6/2011（H1N1）,简称TJ6）相比,新型三源重组SIV（A/Swine/Tianjin/10/2013（H1N1）,简称TJ10）在哺乳动物模型体内的致病力明显增强,TJ10的NS和核糖核蛋白复合物（RNP）基因协同促进了病毒的复制和致病能力。本研究将进一步探索三源重组H1N1亚型SIV的分子致病机制,在一定程度上为下一次流感大流行提供了有力的数据和理论支持。非结构蛋白1（NS1）是流感病毒的一种致病因子,它广泛地与细胞和病毒蛋白互作以促进病毒的高效复制,抑制宿主抗病毒反应。流感病毒感染宿主后,宿主会产生抗病毒的天然免疫应答。宿主模式识别受体可介导宿主的抗病毒信号通路,在多种机制的调控下也会诱导干扰素以及其他相关细胞因子的表达。RIG-I存在于感染细胞的胞质中,它是启动针对IA...
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
不同病毒IFN-β的表达情况
中国农业科学院硕士学位论文第二章不同猪流感病毒NS1基因抑制β干扰素表达的初步研究16图2-1不同病毒IFN-β的表达情况Fig.2-1IFN-βexpressionofdifferentviruses2.3.2NS1重组质粒构建2.3.2.1PCR扩增结果根据设计的相关引物，分别扩增TJ6与TJ10的NS1，其PCR扩增结果如下：图2-2TJ6与TJ10的NS1PCR扩增结果Fig.2-2PCRproductsofNS1ofTJ6andTJ10M:DNA分子量标准(DL2000)；左图1-3：TJ6NS1扩增结果；右图1-2：TJ10NS1扩增结果M:DNAMarker(DL2000);Leftpicture1-3:AmplificationresultsofTJ6NS1;Rightpicture1-2:AmplificationresultsofTJ10NS12.3.2.2菌液鉴定结果放入摇床摇菌6h以后便可以取少量菌液进行菌液PCR鉴定，验证条带大小正确与否，其结果如下图所示：
中国农业科学院硕士学位论文第二章不同猪流感病毒NS1基因抑制β干扰素表达的初步研究17图2-3TJ6与TJ10的NS1PCR菌液鉴定结果Fig.2-3MicrobialidentificationofNS1ofTJ6andTJ10M：DNA分子量标准(DL2000)；左图1-10：重组质粒TJ6NS1菌液鉴定结果；右图1-10：重组质粒TJ10NS1菌液鉴定结果M:DNAMarker(DL2000);Leftpicture1-10:IdentificationresultsofrecombinantplasmidTJ6NS1;Rightpicture1-10:IdentificationresultsofrecombinantplasmidTJ10NS12.3.2.3NS1重组质粒蛋白表达图分别转染不同剂量的TJ6与TJ10的NS1于A549细胞中，24h后收取样品通过Westernblot检测蛋白大小以及是否表达，其结果如下：图2-4TJ6与TJ10的NS1蛋白表达Fig.2-4ProteinexpressionofNS1ofTJ6andTJ10提取质粒后送生物公司测序，经比对序列后发现结果无误，以上种种结果表明TJ6与TJ10的NS1重组质粒构建成功。2.3.3强弱毒NS1对于β干扰素的抑制差异鉴于两株病毒诱导β干扰素存在差异，于是构建了TJ6与TJ10的NS1重组质粒，单独研究其对于β干扰素的抑制情况，在生长状态良好的293T细胞上共转染构建的重组质粒、IFN-β启动子荧光素酶报告质粒以及海肾萤光素酶内参质粒，24h后加Poly：IC刺激，24h后根据双萤光素酶报告基因检测系统进行检测，不论Poly：IC刺激的量为1ug还是2ug，6NS1与10NS1抑制β干扰素差异均为
本文编号：3131450
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【学位级别】：硕士
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不同病毒IFN-β的表达情况
中国农业科学院硕士学位论文第二章不同猪流感病毒NS1基因抑制β干扰素表达的初步研究16图2-1不同病毒IFN-β的表达情况Fig.2-1IFN-βexpressionofdifferentviruses2.3.2NS1重组质粒构建2.3.2.1PCR扩增结果根据设计的相关引物，分别扩增TJ6与TJ10的NS1，其PCR扩增结果如下：图2-2TJ6与TJ10的NS1PCR扩增结果Fig.2-2PCRproductsofNS1ofTJ6andTJ10M:DNA分子量标准(DL2000)；左图1-3：TJ6NS1扩增结果；右图1-2：TJ10NS1扩增结果M:DNAMarker(DL2000);Leftpicture1-3:AmplificationresultsofTJ6NS1;Rightpicture1-2:AmplificationresultsofTJ10NS12.3.2.2菌液鉴定结果放入摇床摇菌6h以后便可以取少量菌液进行菌液PCR鉴定，验证条带大小正确与否，其结果如下图所示：
中国农业科学院硕士学位论文第二章不同猪流感病毒NS1基因抑制β干扰素表达的初步研究17图2-3TJ6与TJ10的NS1PCR菌液鉴定结果Fig.2-3MicrobialidentificationofNS1ofTJ6andTJ10M：DNA分子量标准(DL2000)；左图1-10：重组质粒TJ6NS1菌液鉴定结果；右图1-10：重组质粒TJ10NS1菌液鉴定结果M:DNAMarker(DL2000);Leftpicture1-10:IdentificationresultsofrecombinantplasmidTJ6NS1;Rightpicture1-10:IdentificationresultsofrecombinantplasmidTJ10NS12.3.2.3NS1重组质粒蛋白表达图分别转染不同剂量的TJ6与TJ10的NS1于A549细胞中，24h后收取样品通过Westernblot检测蛋白大小以及是否表达，其结果如下：图2-4TJ6与TJ10的NS1蛋白表达Fig.2-4ProteinexpressionofNS1ofTJ6andTJ10提取质粒后送生物公司测序，经比对序列后发现结果无误，以上种种结果表明TJ6与TJ10的NS1重组质粒构建成功。2.3.3强弱毒NS1对于β干扰素的抑制差异鉴于两株病毒诱导β干扰素存在差异，于是构建了TJ6与TJ10的NS1重组质粒，单独研究其对于β干扰素的抑制情况，在生长状态良好的293T细胞上共转染构建的重组质粒、IFN-β启动子荧光素酶报告质粒以及海肾萤光素酶内参质粒，24h后加Poly：IC刺激，24h后根据双萤光素酶报告基因检测系统进行检测，不论Poly：IC刺激的量为1ug还是2ug，6NS1与10NS1抑制β干扰素差异均为
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