Ala-Gln通过mTOR/p38MAPK信号通路介导仔猪小肠上皮细胞自噬的研究

发布时间：2021-04-11 13:23

　　本项目旨在应用现代营养学、细胞系模型、蛋白免疫印迹、实时荧光定量PCR（RT-PCR）等技术手段,从细胞和分子水平探究Ala-Gln与仔猪小肠上皮细胞自噬之间的内在关系及阐明mTOR/p38MAPK信号通路在仔猪小肠上皮细胞自噬过程中的介导作用。研究结果将为揭示Ala-Gln调控仔猪小肠上皮细胞自噬的作用机制提供理论依据,并为Ala-Gln在仔猪饲料中的科学应用提供理论依据。试验一不同浓度Ala-Gln对仔猪小肠上皮细胞IPEC-1自噬的影响试验采用单因子设计,共设有6个处理,每个处理4个重复。在体外培养的各组IPEC-1细胞中分别添加终浓度为0、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2mM的Ala-Gln。采用MTT法制定IPEC-1细胞浓度标准曲线、生长曲线和检测细胞活力及待细胞生长到融合度到达80%-90%时收集细胞样品进行Western blot。结果表明:（1）所有添加Ala-Gln组的细胞生存率均极显著大于对照组（P<0.01）,其中3.2mM水平添加组细胞生存率高于对照组51.08%（P<0.01）;3.2mM水平添加组的细胞生存率极显著大于0.2mM、0.4m... 

【文章来源】：江西农业大学江西省

【文章页数】：62 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
缩写词表（Abbreviations）
第一章 文献综述
    1 研究目的和意义
    2 国内外研究现状
        2.1 细胞自噬
            2.1.1 细胞自噬的概念及其主要生理功能
            2.1.2 细胞自噬的调控
        2.2 谷氨酰胺及谷氨酰胺二肽对细胞自噬的调控作用
        2.3 mTOR信号通路研究进展
            2.3.1 mTOR信号通路与细胞凋亡
            2.3.2 mTOR信号通路与细胞生长和蛋白合成
            2.3.3 mTOR信号通路与细胞自噬
        2.4 p38MAPK信号通路研究进展
    3 研究内容
        3.1 Ala-Gln对仔猪小肠上皮细胞自噬的影响
        3.2 Ala-Gln调节IPEC-1自噬的mTOR和p38MAPK信号通路研究
        3.3 Ala-Gln对IPEC-1细胞mTOR信号通路下游信号分子及相关基因表达的影响
        3.4 试验技术路线
第二章 试验研究
    试验一 Ala-Gln对仔猪小肠上皮细胞IPEC-1 自噬的影响
        前言
        1 材料与方法
            1.1 材料
                1.1.1 试剂
                1.1.2 仪器与设备
                1.1.3 试验分组与设计
                1.1.4 试验细胞
            1.2 试验方法
                1.2.1 IPEC-1 细胞培养
                1.2.2 MTT试验中IPEC-1细胞接种数与OD值的关系确定及生长曲线的制定
                1.2.3 MTT法检测不同浓度Ala-Gln对IPEC-1细胞活力的影响
                1.2.4 Western blot检测LC3-Ⅱ、p62的蛋白表达量
            1.3 统计分析
        2 结果与分析
            2.1 IPEC-1细胞接种数与OD值关系及IPEC-1 细胞生长曲线
            2.2 Ala-Gln对IPEC-1 细胞活力的影响
            2.3 Ala-Gln对IPEC-1 细胞LC3-Ⅱ、p62蛋白表达量的影响
        3 讨论
            3.1 MMT试验中IPEC-1 细胞接种数与OD值关系及生长曲线
            3.2 Ala-Gln对IPEC-1 细胞活力的影响
            3.3 Ala-Gln对IPEC-1 细胞LC3-Ⅱ、p62蛋白表达量的影响
        4 小结
    试验二 Ala-Gln调节IPEC-1 细胞自噬的mTOR和p38MAPK信号通路研究
        前言
        1 材料与方法
            1.1 材料
                1.1.1 主要试剂
                1.1.2 主要仪器与设备
                1.1.3 试验分组及设计
                1.1.4 试验细胞
            1.2 试验方法
                1.2.1 IPEC-1 细胞培养
                1.2.2 特异性抑制剂雷帕霉素和SB203580对IPEC-1细胞活力的影响
                1.2.3 特异性抑制剂对mTOR、p38MAPK信号通路的影响
                1.2.4 Ala-Gln调节IPEC-1 细胞自噬的mTOR信号通路对细胞自噬的的影响
                1.2.5 Ala-Gln调节IPEC-1 细胞自噬的p38MAPK信号通路对细胞自噬的影响
            1.3 数据统计处理
        2 结果与分析
            2.1 雷帕霉素和SB203580信号通路对IPEC-1细胞活力的影响mTOR信号通路对IPEC-1细胞活力的影响见图2.1
            2.2 Ala-Gln调节IPEC-1 自噬的mTOR信号通路对自噬的的影响
            2.3 Ala-Gln调节IPEC-1 自噬的p38MAPK信号通路对自噬的影响
        3 讨论
        4 小结
    试验三 Ala-Gln对IPEC-1 细胞mTOR信号通路下游信号分子及其相关基因表达的影响
        前言
        1 材料与方法
            1.1 材料
                1.1.1 主要试剂
                1.1.2 主要仪器
            1.2 试验方法
                1.2.1 细胞培养及收集
                1.2.2 Ala-Gln对mTOR信号通路相关蛋白的影响
                1.2.3 细胞总RNA的提取
                1.2.4 引物设计和合成
                1.2.5 cDNA合成操作步骤
                1.2.6 实时荧光定量PCR
            1.3 数据处理及统计分析
        2 结果与分析
            2.1 Ala-Gln对mTOR信号通路相关蛋白的影响
            2.2 Ala-Gln对mTOR信号通路中相关mRNA表达量的影响
            2.3 Ala-Gln对p53、Bax的mRNA表达量的影响
        3 讨论
        4 小结
第三章 本研究总体结论、创新点及有待进一步研究的问题
    1 全文结论
    2 创新点
    3 有待进一步研究的问题
参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]硫化氢通过p38MAPK信号通路对肝纤维化大鼠肝细胞增殖、凋亡的影响[J]. 郑娜娜,岳雅伦,郑勇,刘浩,张传峰,陈卫刚.  世界华人消化杂志. 2015(06)
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[3]脂多糖通过p38/MAPK通路对巨噬细胞自噬的调控作用[J]. 杜涛,江先汉,陈慧,赖义明,张睿,黄海.  中山大学学报(医学科学版). 2014(06)
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[6]细胞自噬:病理学研究的新热点[J]. 邱冬梅,陈莉.  临床与实验病理学杂志. 2012(03)
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[9]MTT法测定大肠杆菌活菌数实验研究[J]. 汪志荣,高琼,马传鑫,李燕妮.  环境科学学报. 2011(12)
[10]雷帕霉素对肺癌细胞mTOR信号通路相关蛋白表达的作用[J]. 曾波航,庄莹,陈静琦,江素华,曾木圣.  肿瘤防治研究. 2011(10)

博士论文
[1]细胞自噬与凋亡的平衡调控在亚硒酸钠治疗白血病过程中的作用机制[D]. 姜茜.北京协和医学院 2012
[2]mTOR信号通路在细胞生长调控中的作用与机制研究[D]. 王志钢.内蒙古大学 2008
[3]冬凌草甲素诱导人肿瘤细胞自噬与凋亡关系的研究[D]. 崔侨.沈阳药科大学 2007

硕士论文
[1]眼镜蛇神经毒素对人肺腺癌A549细胞生长抑制作用研究[D]. 申健.苏州大学 2014
[2]雷帕霉素调控足细胞自噬在糖尿病肾病中的作用研究[D]. 肖堂利.第三军医大学 2014
[3]谷氨酰胺对奶牛乳腺上皮细胞生长与增殖及HSP70表达的影响[D]. 史红霞.南京农业大学 2009
[4]谷氨酰胺对鲤鱼肠上皮细胞生长和代谢的影响[D]. 姜俊.四川农业大学 2005



本文编号：3131330