TRIM13对EMCV体外感染增殖的影响及机制初探
发布时间：2021-04-12 23:40
脑心肌炎病毒（Encephalomyocarditis virus,EMCV）是一种能够引起大规模人畜共患传染病和大量家畜死亡的病原体,被广泛用于研究抗病毒免疫、病毒性心肌炎和胰岛素依赖型糖尿病等的模型。已有研究发现RLR介导的IFN信号通路在EMCV感染过程中发挥重要作用,固有免疫通过激活干扰素和促炎细胞因子的产生对病毒感染作出反应,其中产生的TRIM家族蛋白,对多种病毒的感染具有调控作用。本研究以具有自身多聚泛素化修饰的E3泛素连接酶作用的TRIM13作为研究对象,分别通过上调、下调蛋白表达水平,观察其对EMCV的作用,并对机制进行了初步探索,得到以下结果:1、EMCV感染HEK293细胞后,TRIM13的mRNA水平随病毒感染时间逐渐升高,TRIM13蛋白在病毒感染的36h和48h时与同期未接毒组相比显著上调,提示TRIM13与EMCV体外感染宿主细胞相关。2、通过构建TRIM13表达上调和下调的细胞并进行EMCV感染试验,结果证明,TRIM13表达增加可显著促进EMCV的增殖（P<0.05）;利用靶向TRIM13的RNA干扰序列下调TRIM13后,显著抑制EMCV在细胞中...
【文章来源】：西北民族大学甘肃省
【文章页数】：84 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
EMCV蛋白结构图
西北民族大学生命科学与工程学院2020届硕士研究生学位论文8图1-2TRIM蛋白的结构域Fig.1-2Domainstructureoftripartitemotif(TRIM)proteins[62]2.2TRIM家族蛋白的抗病毒特性许多TRIM蛋白在抗病毒天然免疫中扮演重要的作用。多年来，TRIM家族的许多成员被认为是潜在的病毒限制因子[88]。2004年首次发表TRIM蛋白对病毒感染作用的文章，根据这项研究，人类免疫缺陷病毒（HIV）可以感染灵长目动物的细胞，但由于存在显性抑制因子而不能进行逆转录，该限制因子被鉴定为TRIM5α[89]。大多数病毒受TRIM家族蛋白影响，属于逆转录病毒[90]。另外，人类11号染色体的短臂上具有该家族基因[67]（图1-3），大多数TRIM基因包括TRIM3、TRIM5、TRIM6、TRIM21、TRIM22、TRIM34、TRIM66和TRIM68都定位在染色体短臂上。其中部分基因被鉴定为病毒的限制因子，如TRIM5、22、34是有效的HIV抑制剂[91]。此外，TRIM蛋白可以在不同的阶段影响病毒的复制，包括病毒的侵入、病毒基因组的复制以及病毒的释放等过程[92-94]。例如，TRIM5α和TRIM22可以抑制HIV-1的感染[95]；TRIM5和TRIM19(PML)能抑制
西北民族大学生命科学与工程学院2020届硕士研究生学位论文10图1-3TRIM家族蛋白定位于人11号染色体短臂Fig.1-3Humanchromosome11andthelocalizedTRIMfamilyproteinspresentonshortarm[67]2.3TRIM家族蛋白与免疫调控泛素化修饰在机体的免疫应答过程中发挥重要的调控作用，作为泛素化修饰过程中的关键分子，E3泛素连接酶TRIM是天然免疫调控研究的重点对象，在抗病毒方面扮演重要角色。相反，TRIM27，TRIM30和TRIM38是IFN信号通路的负调节剂，它们通过促进其靶蛋白的K48连接多聚泛素化而发挥作用[117-119]。TRIM8介导细胞信号传导抑制因子1（SOCS1）的泛素化降解正向调控IFN-γ相关信号通路[120]。TRIM21可以介导IKKγ的单泛素化以及自噬性降解进而抑制NF-κB的活化。除此之外TRIM21过表达还抑制日本脑炎病毒（JEV）感染后，人小胶质细胞中I型干扰素的表达[121]。TRIM25被证明在K63处泛素化RIG-I，是RIG-I必需的关键修饰物[122]。TRIM31促进了MAVS的K63连接的多泛素化和聚集，从而诱导IFN的表达以抵抗病毒的感染[123]。TRIM44通过去除K48连接的MAVS的多聚泛素化作用来稳定MAVS[124]。另外，许多TRIM蛋白的表达在固有免疫中被上调[125-126]，表明其他的TRIM蛋白也可能在病毒感染激活的免疫反应中扮演重要作用。然而TRIM13与EMCV抗病毒反应的关系尚未明确。TRIM家族蛋白除了直接干预病毒进入和复制外，许多TRIM家族成员调控固有免疫应答相关信号通路，进而间接调控病毒的增殖[127]。如TRIM4、TRIM5、TRIM6、TRIM8、TRIM14、TRIM15、TRIM23、TRIM25和TRIM56可以正调控IFN信号通路中的抗病毒免疫应答[128-136]。TRIM23是RIG-I和toll样受体的
本文编号：3134190
【文章来源】：西北民族大学甘肃省
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【学位级别】：硕士
【部分图文】：
EMCV蛋白结构图
西北民族大学生命科学与工程学院2020届硕士研究生学位论文8图1-2TRIM蛋白的结构域Fig.1-2Domainstructureoftripartitemotif(TRIM)proteins[62]2.2TRIM家族蛋白的抗病毒特性许多TRIM蛋白在抗病毒天然免疫中扮演重要的作用。多年来，TRIM家族的许多成员被认为是潜在的病毒限制因子[88]。2004年首次发表TRIM蛋白对病毒感染作用的文章，根据这项研究，人类免疫缺陷病毒（HIV）可以感染灵长目动物的细胞，但由于存在显性抑制因子而不能进行逆转录，该限制因子被鉴定为TRIM5α[89]。大多数病毒受TRIM家族蛋白影响，属于逆转录病毒[90]。另外，人类11号染色体的短臂上具有该家族基因[67]（图1-3），大多数TRIM基因包括TRIM3、TRIM5、TRIM6、TRIM21、TRIM22、TRIM34、TRIM66和TRIM68都定位在染色体短臂上。其中部分基因被鉴定为病毒的限制因子，如TRIM5、22、34是有效的HIV抑制剂[91]。此外，TRIM蛋白可以在不同的阶段影响病毒的复制，包括病毒的侵入、病毒基因组的复制以及病毒的释放等过程[92-94]。例如，TRIM5α和TRIM22可以抑制HIV-1的感染[95]；TRIM5和TRIM19(PML)能抑制
西北民族大学生命科学与工程学院2020届硕士研究生学位论文10图1-3TRIM家族蛋白定位于人11号染色体短臂Fig.1-3Humanchromosome11andthelocalizedTRIMfamilyproteinspresentonshortarm[67]2.3TRIM家族蛋白与免疫调控泛素化修饰在机体的免疫应答过程中发挥重要的调控作用，作为泛素化修饰过程中的关键分子，E3泛素连接酶TRIM是天然免疫调控研究的重点对象，在抗病毒方面扮演重要角色。相反，TRIM27，TRIM30和TRIM38是IFN信号通路的负调节剂，它们通过促进其靶蛋白的K48连接多聚泛素化而发挥作用[117-119]。TRIM8介导细胞信号传导抑制因子1（SOCS1）的泛素化降解正向调控IFN-γ相关信号通路[120]。TRIM21可以介导IKKγ的单泛素化以及自噬性降解进而抑制NF-κB的活化。除此之外TRIM21过表达还抑制日本脑炎病毒（JEV）感染后，人小胶质细胞中I型干扰素的表达[121]。TRIM25被证明在K63处泛素化RIG-I，是RIG-I必需的关键修饰物[122]。TRIM31促进了MAVS的K63连接的多泛素化和聚集，从而诱导IFN的表达以抵抗病毒的感染[123]。TRIM44通过去除K48连接的MAVS的多聚泛素化作用来稳定MAVS[124]。另外，许多TRIM蛋白的表达在固有免疫中被上调[125-126]，表明其他的TRIM蛋白也可能在病毒感染激活的免疫反应中扮演重要作用。然而TRIM13与EMCV抗病毒反应的关系尚未明确。TRIM家族蛋白除了直接干预病毒进入和复制外，许多TRIM家族成员调控固有免疫应答相关信号通路，进而间接调控病毒的增殖[127]。如TRIM4、TRIM5、TRIM6、TRIM8、TRIM14、TRIM15、TRIM23、TRIM25和TRIM56可以正调控IFN信号通路中的抗病毒免疫应答[128-136]。TRIM23是RIG-I和toll样受体的
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