H5N1亚型禽流感病毒非结构蛋白单克隆抗体的制备及其表位研究
发布时间：2021-04-14 13:33
禽流感（Avian influenza, AI）是由正粘病毒科流感病毒属A型AI病毒（Avian influenza virus,AIV）所引起的一种禽类传染病。近年来，以H5N1亚型为代表的AI的流行使得养禽业遭受严重损失，同时对人类健康和世界公共卫生安全构成重大威胁。疫苗免疫接种是预防AI有效措施。然而疫苗的大范围使用，免疫鸡群血清学阳性率极高，与病毒感染途径引起的血清学阳性相混淆。这两种途径发生的血清学改变，通过现有的血清学检测技术均不能鉴别，给AI的监控工作带来一定困扰，因此，很多研究开始关注AI感染和免疫的鉴别（Differentiation of infected and vaccinatedanimals, DIVA）方法研究。目前对流感病毒感染和免疫的鉴别研究主要集中在非结构蛋白（NS1）上，其中针对NS1的单克隆抗体（MAb）是必不可少的重要基础，因此，开展了本项研究工作。本研究通过原核表达获得了NS1蛋白，浓缩纯化后，免疫BALB/c小鼠，利用常规的MAb制备技术，将免疫小鼠脾细胞和SP2/0融合，经35次克隆后，共制备2株能稳定分泌抗NS1特...
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：53 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
qRT-PCR流程图(SakuraiandShibasaki,2012)
NASBA 是以转录和逆转录为基础的等温核酸扩增体系(Compton, 1991)，此方法利用了RTase、RNA 聚合酶、RnaseH、含 T7 启动子的引物 (primer 1)和反向引物 (primer 2)。NASBA已经应用于H5和H7亚型HA和M的检测(Collins et al., 2003a; Collins et al., 2002, 2003b; Lau et al.,2004)，NASBA 的高灵敏性和特异性使它成为检测流感病毒强有力的工具之一，且它不需要昂贵的仪器如热循环仪和荧光检测器，因此，NASBA 有望在发展中国家流感诊断中发挥重要作用。DNA芯片是一种高通量、可平行测定的检测方法(Pease et al., 1994; Schena et al., 1995)，在流感病毒诊断中发挥重要作用(Kessler et al., 2004; Li et al., 2001; Riabinin et al., 2010; Ryabinin et al.,2011)。最近报道了用于鉴定流感病毒亚型的通用寡核苷酸芯片(Ryabinin et al., 2011)，包括区分HA亚型(H1–H13, H15和H16)和NA亚型(N1–N9)的两套寡核苷酸探针。Huang等(Huang et al., 2009)开发出一种芯片可同时检测A型和B型流感病毒，以及区分H1N1、H3N2和H5N1亚型AIV。Mchip通过流感病毒M基因片段来鉴定流感病毒及其亚型(Dawson et al., 2007; Dawson et al., 2006)，它杂交只用了15个短寡核苷酸。由于DNA芯片检测数据设备昂贵，它的应用有限，但其高通量的特点使其具有良好的发展前景。图 1.2 LAMP 流程图(Sakurai and Shibasaki, 2012)Fig 1.2 Schematic diagram of LAMP (cited by Sakurai and Shibasaki, 2012)
图 1.3 NASBA 流程图(Sakurai and Shibasaki, 2012)Fig 1.3 Schematic diagram of NASBA (cited by Sakurai and Shibasaki, 2012)图 1.4 芯片流程图(Sakurai and Shibasaki, 2012)Fig 1.4 Schematic diagram of microarry (cited by Sakurai and Shibasaki, 2012)
【参考文献】：
期刊论文
[1]计算机模建和点突变分析抗人CD40单克隆抗体5C11识别的抗原表位[J]. 张婷,张学光,瞿秋霞,章良. 中国肿瘤生物治疗杂志. 2011(04)
博士论文
[1]恶性疟原虫Pf332抗原的免疫原性分析[D]. 杜承.吉林大学 2010
本文编号：3137409
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：53 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
qRT-PCR流程图(SakuraiandShibasaki,2012)
NASBA 是以转录和逆转录为基础的等温核酸扩增体系(Compton, 1991)，此方法利用了RTase、RNA 聚合酶、RnaseH、含 T7 启动子的引物 (primer 1)和反向引物 (primer 2)。NASBA已经应用于H5和H7亚型HA和M的检测(Collins et al., 2003a; Collins et al., 2002, 2003b; Lau et al.,2004)，NASBA 的高灵敏性和特异性使它成为检测流感病毒强有力的工具之一，且它不需要昂贵的仪器如热循环仪和荧光检测器，因此，NASBA 有望在发展中国家流感诊断中发挥重要作用。DNA芯片是一种高通量、可平行测定的检测方法(Pease et al., 1994; Schena et al., 1995)，在流感病毒诊断中发挥重要作用(Kessler et al., 2004; Li et al., 2001; Riabinin et al., 2010; Ryabinin et al.,2011)。最近报道了用于鉴定流感病毒亚型的通用寡核苷酸芯片(Ryabinin et al., 2011)，包括区分HA亚型(H1–H13, H15和H16)和NA亚型(N1–N9)的两套寡核苷酸探针。Huang等(Huang et al., 2009)开发出一种芯片可同时检测A型和B型流感病毒，以及区分H1N1、H3N2和H5N1亚型AIV。Mchip通过流感病毒M基因片段来鉴定流感病毒及其亚型(Dawson et al., 2007; Dawson et al., 2006)，它杂交只用了15个短寡核苷酸。由于DNA芯片检测数据设备昂贵，它的应用有限，但其高通量的特点使其具有良好的发展前景。图 1.2 LAMP 流程图(Sakurai and Shibasaki, 2012)Fig 1.2 Schematic diagram of LAMP (cited by Sakurai and Shibasaki, 2012)
图 1.3 NASBA 流程图(Sakurai and Shibasaki, 2012)Fig 1.3 Schematic diagram of NASBA (cited by Sakurai and Shibasaki, 2012)图 1.4 芯片流程图(Sakurai and Shibasaki, 2012)Fig 1.4 Schematic diagram of microarry (cited by Sakurai and Shibasaki, 2012)
【参考文献】：
期刊论文
[1]计算机模建和点突变分析抗人CD40单克隆抗体5C11识别的抗原表位[J]. 张婷,张学光,瞿秋霞,章良. 中国肿瘤生物治疗杂志. 2011(04)
博士论文
[1]恶性疟原虫Pf332抗原的免疫原性分析[D]. 杜承.吉林大学 2010
本文编号：3137409
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