双向转录/表达载体的构建及其在马流感病毒反向遗传系统中的应用
发布时间：2021-04-14 12:49
为构建用于拯救流感病毒的双向转录/表达载体,本研究以p EF4/myc-His B为骨架首次构建了含有人源的EF1-α和pol I双启动子的载体p EZ,并通过报告基因证明其具有双向转录/表达的功能。此外,基于p EZ载体分别构建含有马流感病毒（EIV）A/equine/Jilin/1/1989（H3N8）（JL89）株各个节段c DNA的8个重组质粒,且其中HA节段通过点突变技术引入分子遗传标记（HindⅢ和NdeⅠ酶切位点）。将8个重组质粒共转染293T细胞,拯救出病毒（r JL89）。病毒滴度测定显示,拯救的第一代病毒具有较高的病毒滴度（2.38×105 TCID50/m L）;序列分析表明,r JL89与JL89的各个节段的序列几乎一致性（99.9%100%）;酶切鉴定表明,r JL89稳定携带分子遗传标记（HindⅢ和NdeⅠ酶切位点）;血凝效价测定表明,r JL89与JL89有相同的血凝效价（28）;生长动力学研究显示,r JL89具有与JL89相同的生物学特性。以上结果证明,基于p EZ载体建立了EIV JL89株的8质粒反向遗传系统,该系统可以拯救...
【文章来源】：中国预防兽医学报. 2016,38(11)北大核心CSCD
【文章页数】：5 页
【部分图文】：
绿色荧光的检测Fig.3Identification of green fluorescence
以真核表达载体p EF4/myc-His B为骨架进行改造:在其KpnⅠ和BclⅠ酶切位点之间插入必需元件(Insert 1)-鼠源的polⅠ终止子(Tpol I,33 bp)、Bsm BⅠ酶切位点和人源的polⅠ启动子(Ppol I,236 bp)序列;在其SphⅠ和Bsp QⅠ酶切位点之间插入一段Linker(5"-CTGGG GATGCGGTGGGCTCTATG-3")(Insert 2),替换原载体上从f1 ori到SV40 poly A信号之间的非必需元件(图1)。改造后的载体命名为p EZ。1.3 双向转录/表达功能的鉴定
p EZ-v EGFP的构建Fig.2Construction of p EZ-v EGFP
本文编号：3137347
【文章来源】：中国预防兽医学报. 2016,38(11)北大核心CSCD
【文章页数】：5 页
【部分图文】：
绿色荧光的检测Fig.3Identification of green fluorescence
以真核表达载体p EF4/myc-His B为骨架进行改造:在其KpnⅠ和BclⅠ酶切位点之间插入必需元件(Insert 1)-鼠源的polⅠ终止子(Tpol I,33 bp)、Bsm BⅠ酶切位点和人源的polⅠ启动子(Ppol I,236 bp)序列;在其SphⅠ和Bsp QⅠ酶切位点之间插入一段Linker(5"-CTGGG GATGCGGTGGGCTCTATG-3")(Insert 2),替换原载体上从f1 ori到SV40 poly A信号之间的非必需元件(图1)。改造后的载体命名为p EZ。1.3 双向转录/表达功能的鉴定
p EZ-v EGFP的构建Fig.2Construction of p EZ-v EGFP
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