牛病毒性腹泻黏膜病实用诊断方法的建立
发布时间：2021-04-15 01:21
牛病毒性腹泻黏膜病（BVD）是由牛病毒性腹泻病病毒（BVDV）感染引起的疾病，它被国际兽疫局（OIE）定为B类传染病，我国在进出口检疫中把它定位为二类传染病。其临床症状主要表现为腹泻，消化道黏膜脱落、糜烂。会导致母畜流产、死胎和畸胎等。尤其是会产生持续性感染和免疫耐受，在临床检测上经常出现漏检和检不出的情况，这给该病的预防、诊断、治疗带来障碍。针对上述问题，本论文以研究实用的诊断方法为出发点，旨在为生产实践过程中出现的不同情况提供针对性的检测方法，具体成果如下：1建立SYER Green荧光定量RT-PCR方法本实验针对BVDV5’端非翻译区的保守序列设计了一对特异性的引物，进行普通PCR扩增反应，目的基因片段长度是181bp。实验建立并优化了SYERGreen荧光定量RT-PCR方法，熔解曲线分析结果显示在86.5±0.5℃为单一峰，无引物二聚体和非特异性扩增现象。通过荧光定量RT-PCR方法建立了标准曲线，扩增效率为95.36%，相关系数为0.996，在102～108范围内具有良好的线性关系。对47份血清的检测结果显示荧光RT-PCR方法准确、特异性强，在4小时内就可以得到检测结果...
【文章来源】：西南民族大学四川省
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
正常生长的MDBK细胞
对建立的 RT-PCR 方法的重复性进行检测，对 4 个不同样本进行检测，应中，每个样本做 3 个平行，可以测定变异系数。样本检测样本处理：将松藩、汶川、红原采集的牦牛血离心并收集血清，根据法提取各个样本中的 RNA，cDNA 合成按照反转录试剂盒说明书进行好的反应体系和反应条件对上述样本 cDNA 分别进行荧光定量 PCR 和 检测。验结果正常细胞的 MDBK 细胞与 BVDV(OregonC24V 株和 Yak 株)感染细胞
图 1-3 对照 MDBK 细胞 图 1-4 Yak 感染的 MDBK 细胞Fig1-3 Control MDBK Fig1-4 MDBK infected by Yak图 1-1 是正常的 MDBK 细胞，图 1-2 是 BVDV OregonC24V 感染 MDBK，当感染 24 小时后可见细胞上有病变产生。图 1-3 是未接病毒的 MDBK 对胞，图 1-4 是 BVDVYak 株感染 MDBK 细胞，培养 3 天后未见细胞病变。 检测 BVDV，PCR 后经 1%琼脂糖凝胶电泳：M 1 2 3 4
本文编号：3138385
【文章来源】：西南民族大学四川省
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
正常生长的MDBK细胞
对建立的 RT-PCR 方法的重复性进行检测，对 4 个不同样本进行检测，应中，每个样本做 3 个平行，可以测定变异系数。样本检测样本处理：将松藩、汶川、红原采集的牦牛血离心并收集血清，根据法提取各个样本中的 RNA，cDNA 合成按照反转录试剂盒说明书进行好的反应体系和反应条件对上述样本 cDNA 分别进行荧光定量 PCR 和 检测。验结果正常细胞的 MDBK 细胞与 BVDV(OregonC24V 株和 Yak 株)感染细胞
图 1-3 对照 MDBK 细胞 图 1-4 Yak 感染的 MDBK 细胞Fig1-3 Control MDBK Fig1-4 MDBK infected by Yak图 1-1 是正常的 MDBK 细胞，图 1-2 是 BVDV OregonC24V 感染 MDBK，当感染 24 小时后可见细胞上有病变产生。图 1-3 是未接病毒的 MDBK 对胞，图 1-4 是 BVDVYak 株感染 MDBK 细胞，培养 3 天后未见细胞病变。 检测 BVDV，PCR 后经 1%琼脂糖凝胶电泳：M 1 2 3 4
本文编号：3138385
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