鸽毛滴虫外泌体的分离鉴定及蛋白质谱分析
发布时间：2021-04-15 15:41
旨在研究鸽毛滴虫是否分泌外泌体及虫源外泌体的蛋白组成和功能,为探索外泌体在鸽毛滴虫寄生过程中的作用奠定基础。采集鸽毛滴虫感染个体口腔及咽部病灶处样本,进行分离培养及纯化,使用显微镜鉴定虫体形态,提取DNA并比对其序列,确定培养物是否为鸽毛滴虫虫株;通过对培养液上清进行超速离心,透射电子显微镜、Western blot技术和纳米颗粒追踪分析（nanoparticle tracking analysis, NTA）鉴定培养液上清中是否含有虫源外泌体;最后通过Label-free技术分析虫源外泌体的蛋白质谱表达。结果显示,虫体具有明显的毛滴虫形态及特征,与鸽毛滴虫ITS1/5.8S/ITS2基因比对率达98%。从虫体培养液中提取的囊泡经透射电子显微镜观察具有明显的茶托样结构;NTA结果显示,粒径集中于125.1 nm,峰值粒径为132.3 nm,占比99.3%;CD63和TSG101等外泌体标记蛋白的条带明显,表明提取物为外泌体。质谱结果显示,烯醇酶、3-磷酸甘油醛-脱氢酶、磷酸甘油酸变位酶和延伸因子为表达量较高的蛋白质。GO功能注释显示外泌体蛋白富集到细胞内和胞浆等细胞组分,发挥GTP连接...
【文章来源】：畜牧兽医学报. 2020,51(07)北大核心CSCD
【文章页数】：11 页
【部分图文】：
鸽毛滴虫显微镜鉴定
2.1.2 DNA提取及测序经PCR扩增ITS1/5.8S/ITS2基因后,琼脂糖凝胶电泳的结果见图2,由图可见,电泳片段条带明显,长度在250～500 bp。经测序,片段长度为343 bp,在NCBI数据库中进行BLAST比对,结果见表1,扩增产物与鸽毛滴虫ITS1/5.8S/ITS2基因具有98.43%的相似性。
表1 测序产物与ITS1/5.8S/ITS2基因BlAST结果Table 1 BLAST results of sequencing products and ITS1/5.8 S/ITS2 gene 指标 Index 数值 Value 匹配分值 Max score 558 总体分值 Total score 558 覆盖率/% Query cover 97 Expect值 E value 6×10-164 一致性/% Consistency 98.432.3 外泌体蛋白质谱分析
【参考文献】：
期刊论文
[1]寄生虫来源的外泌体研究进展[J]. 倪爱心,麻慧,陈继兰. 畜牧兽医学报. 2019(05)
[2]猪繁殖与呼吸综合征病毒感染的MARC-145细胞中外泌体的分离与鉴定[J]. 张亮,王帅帅,陈忍霞,陶佳丽,范阔海,段马魁,扆妍妍,姜俊兵. 畜牧兽医学报. 2017(07)
[3]细粒棘球绦虫延伸因子1生物信息学分析[J]. 李超群,樊海宁,张耀刚,曹得萍. 中国公共卫生. 2017(04)
[4]乳中miRNA的研究进展[J]. 林德麟,陈婷,黎梦,谢梅英,习欠云,孙加节,张永亮. 畜牧兽医学报. 2016(09)
[5]热休克蛋白与寄生虫感染的关系[J]. 王强,李勉,张龙现. 中国畜牧兽医. 2009(06)
[6]亚洲牛带绦虫泛素缀合酶基因及其蛋白质结构与功能的生物信息学分析[J]. 廖兴江,戴佳琳,周灵贵,申萍香,黄江,黄艳,胡旭初. 中国人兽共患病学报. 2009(03)
[7]弓形虫信号转导蛋白14-3-3基因的克隆与表达[J]. 都建,沈继龙,汪学龙,王维. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2003(05)
[8]日本血吸虫重组信号蛋白14-3-3疫苗免疫保护性的观察[J]. 刘庆中,沈继龙. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2003(05)
硕士论文
[1]亚洲带绦虫外泌体的分离鉴定及其对LoVo细胞的影响[D]. 梁盼红.中国农业科学院 2019
[2]柔嫩艾美耳球虫外泌体的分离与鉴定及泛素蛋白功能初步研究[D]. 李志行.上海师范大学 2019
[3]犬源毛滴虫的分离鉴定及其生物学特性研究[D]. 孟莹.吉林大学 2013
本文编号：3139616
【文章来源】：畜牧兽医学报. 2020,51(07)北大核心CSCD
【文章页数】：11 页
【部分图文】：
鸽毛滴虫显微镜鉴定
2.1.2 DNA提取及测序经PCR扩增ITS1/5.8S/ITS2基因后,琼脂糖凝胶电泳的结果见图2,由图可见,电泳片段条带明显,长度在250～500 bp。经测序,片段长度为343 bp,在NCBI数据库中进行BLAST比对,结果见表1,扩增产物与鸽毛滴虫ITS1/5.8S/ITS2基因具有98.43%的相似性。
表1 测序产物与ITS1/5.8S/ITS2基因BlAST结果Table 1 BLAST results of sequencing products and ITS1/5.8 S/ITS2 gene 指标 Index 数值 Value 匹配分值 Max score 558 总体分值 Total score 558 覆盖率/% Query cover 97 Expect值 E value 6×10-164 一致性/% Consistency 98.432.3 外泌体蛋白质谱分析
【参考文献】：
期刊论文
[1]寄生虫来源的外泌体研究进展[J]. 倪爱心,麻慧,陈继兰. 畜牧兽医学报. 2019(05)
[2]猪繁殖与呼吸综合征病毒感染的MARC-145细胞中外泌体的分离与鉴定[J]. 张亮,王帅帅,陈忍霞,陶佳丽,范阔海,段马魁,扆妍妍,姜俊兵. 畜牧兽医学报. 2017(07)
[3]细粒棘球绦虫延伸因子1生物信息学分析[J]. 李超群,樊海宁,张耀刚,曹得萍. 中国公共卫生. 2017(04)
[4]乳中miRNA的研究进展[J]. 林德麟,陈婷,黎梦,谢梅英,习欠云,孙加节,张永亮. 畜牧兽医学报. 2016(09)
[5]热休克蛋白与寄生虫感染的关系[J]. 王强,李勉,张龙现. 中国畜牧兽医. 2009(06)
[6]亚洲牛带绦虫泛素缀合酶基因及其蛋白质结构与功能的生物信息学分析[J]. 廖兴江,戴佳琳,周灵贵,申萍香,黄江,黄艳,胡旭初. 中国人兽共患病学报. 2009(03)
[7]弓形虫信号转导蛋白14-3-3基因的克隆与表达[J]. 都建,沈继龙,汪学龙,王维. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2003(05)
[8]日本血吸虫重组信号蛋白14-3-3疫苗免疫保护性的观察[J]. 刘庆中,沈继龙. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2003(05)
硕士论文
[1]亚洲带绦虫外泌体的分离鉴定及其对LoVo细胞的影响[D]. 梁盼红.中国农业科学院 2019
[2]柔嫩艾美耳球虫外泌体的分离与鉴定及泛素蛋白功能初步研究[D]. 李志行.上海师范大学 2019
[3]犬源毛滴虫的分离鉴定及其生物学特性研究[D]. 孟莹.吉林大学 2013
本文编号：3139616
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