牛诺如病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

发布时间：2021-04-16 17:49

　　牛诺如病毒（BNoV）是国内新发的犊牛腹泻病原,笔者拟建立检测BNoV的Real-time PCR方法。根据BNoV流行株的RNA聚合酶（RdRp）基因序列设计引物,通过优化反应条件和体系,成功建立基于EvaGreen检测BNoV的Real-time PCR方法。该检测方法的Ct值与标准品模板在2.24×10²～2.24×10⁸拷贝·μL^-1线性关系良好,相关系数R²=0.997,扩增效率为98.44%;该方法可特异性检出BNoV,对其他犊牛腹泻相关病原呈阴性;最低检测限为22.4拷贝·μL^-1;批间和批内的变异系数均小于2%,重复性好。对2017年9月—2019年5月采自河南省的221份犊牛腹泻样本中BNoV的检出率为11.31%（25/221）,采样场阳性率为92.86%（13/14）。本试验所建方法灵敏度高、特异性强、稳定性好,为BNoV的检测和流行病学调查提供了有力手段。 

【文章来源】：畜牧兽医学报. 2020,51(07)北大核心CSCD

【文章页数】：9 页

【部分图文】：

BNoV RdRp基因目的片段的PCR扩增

重组质粒pMD18T-BNoV-RdRp经扩增后,扩增产物在Tm值为87 ℃处出现单一波峰(图2),无引物二聚体和非特异性扩增峰。图3 荧光定量PCR方法的标准曲线

荧光定量PCR方法的标准曲线

【参考文献】：
期刊论文
[1]牛病毒性腹泻病毒链特异性SYBR Green荧光定量PCR方法的建立及应用[J]. 刘存,邓永,梁琳,李金祥,张彦明,崔尚金.  畜牧兽医学报. 2019(10)
[2]部分地区奶牛腹泻粪便样中诺如病毒的检测和演化分析[J]. 王玥琳,郭紫晶,岳华,汤承.  畜牧兽医学报. 2019(05)
[3]检测纽布病毒的Real-time RT-PCR方法的建立与应用[J]. 郭紫晶,何琪富,汤承,张斌,岳华.  畜牧兽医学报. 2019(04)
[4]猪圆环病毒3型TaqMan荧光定量PCR方法的建立和初步应用[J]. 李畅,库旭钢,王俊伟,李静,朱玲,何启盖.  畜牧兽医学报. 2018(06)
[5]三种荧光染料SYBR GreenⅠ、LCGreen PLUS、EvaGreen在实时定量PCR应用中的比较[J]. 邵晓青,吕申,冯璐,李梅.  大连医科大学学报. 2016(05)



本文编号：3141892