猪细小病毒结构蛋白VP2的分子特征

发布时间：2021-04-19 23:49

　　猪细小病毒为细小病毒科细小病毒亚科细小病毒属成员。猪细小病毒是单股负链线性DNA病毒,病毒直径约为20nm左右。猪细小病毒为无囊膜的二十面体结构,其蛋白外鞘由60个次蛋白衣壳构成。猪细小病毒能够引起猪的繁殖障碍,主要表现为怀孕母猪引起胎儿木乃伊化、流产、新生仔猪死亡等。猪细小病毒基因组大小约为5Kb左右,包含有2个完整的开放阅读框（ORF）,3’端的ORF编码非结构蛋白NS,5’端的ORF编码结构蛋白VP。结构蛋白VP又可细分为VP1蛋白和VP2蛋白。本研究根据GenBank中登录的猪细小病毒VP2基因序列特征设计特异性引物,采用PCR方法对从福建省某疑似猪细小病毒感染的死胎中分离的猪细小病毒福建株中扩增其VP2基因,将扩增后的目的片段经胶回收后克隆测序。结果表明,所扩增的目的片段编码有完整的VP2开放阅读框。VP2基因全长为1740bp,编码有579个氨基酸,蛋白大小为64.287 Kd,强碱性氨基酸（K、R）37个,强酸性氨基酸（D、E）48个,疏水性氨基酸（A、1、L、F、W、V）159个,极性氨基酸（N、C、Q、S、T、Y）213个。所编码的VP2蛋白理论等电点为5.81。负电... 

【文章来源】：福建农林大学福建省

【文章页数】：39 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
第一章 文献综述
    1 猪细小病毒的病原学
    2 流行病学
    3 猪细小病毒的基因组结构特征
    4 猪细小病毒的诊断
        4.1 病毒分离
        4.2 血凝试验和血凝抑制试验
        4.3 血清中和试验
        4.4 乳胶凝集试验
        4.5 对流免疫电泳
        4.6 免疫荧光技术
        4.7 免疫层析技术
        4.8 酶联免疫吸附试验
    5 猪细小病毒疫苗研究
        5.1 亚单位疫苗
        5.2 多价疫苗
        5.3 核酸免疫疫苗
    6 本研究的目的与意义
第二章 猪细小病毒结构蛋白VP2的生物信息学分析
    1 材料与方法
        1.1 主要实验试剂和分子生物学材料
        1.2 实验仪器
        1.3 病毒分离
            1.3.1 病料收集与处理
            1.3.2 病料接种
            1.3.3 病毒增殖
            1.3.4 血凝活性检测
        1.4 病毒VP2基因的克隆
            1.4.1 病毒核酸的提取
            1.4.2 引物设计
            1.4.3 PCR扩增
            1.4.4 PCR结果的的电泳鉴定
            1.4.5 目的基因的胶回收
            1.4.6 胶回收产物的连接与转化
            1.4.7 重组质粒的提取
            1.4.8 重组质粒的PCR鉴定
            1.4.9 重组质粒的酶切鉴定
        1.5 序列测定与拼接
        1.6 VP2基因的生物信息学分析
            1.6.1 基本理化性质分析
            1.6.2 蛋白疏水性分析
            1.6.3 抗原性分析
            1.6.4 三级结构模拟
            1.6.5 核苷酸同源性分析
            1.6.6 遗传进化分析
    2 结果
        2.1 VP2的PCR扩增
        2.2 VP2的核苷酸序列和氨基酸序列
        2.3 VP2蛋白的基本理化特征
        2.4 VP2蛋白的疏水性分析
        2.5 VP2蛋白Proteam分析
        2.6 VP2蛋白三级结构预测
        2.7 VP2核苷酸同源性分析
        2.8 遗传进化分析
    3 结果与讨论
第三章 全文结论
参考文献
致谢



本文编号：3148553