鸡马立克氏病病毒VP23蛋白调控DNA受体信号通路拮抗IFN-β产生的机制研究
发布时间：2021-04-21 20:59
鸡马立克氏病病毒（MDV）是禽类疱疹病毒的典型代表,在鸡群中极为常见。MDV感染后引起鸡内脏组织发生严重的淋巴瘤,伴随显著的免疫抑制,是养禽业的一个主要威胁。天然免疫是机体抵抗病毒感染的第一道防线。Ⅰ型干扰素（IFN）,特别是IFN-β,是天然免疫系统抗病毒作用的代表性细胞因子。在感染过程中,宿主细胞通过表面及胞内的模式识别受体识别病原微生物中高度保守的病原相关分子模式,诱导IFN-β表达,激活宿主天然免疫反应。除Toll样受体、RIG-Ⅰ样受体、Nod样受体等模式识别受体外,研究者近年来又发现了一系列DNA受体。宿主细胞DNA受体信号通路在机体抵抗DNA病毒、细菌以及抗肿瘤天然免疫中均发挥着关键作用。禽类抗病毒天然免疫机制与哺乳动物相比研究相对滞后,这在很大程度上限制了禽类病毒性传染病感染与免疫机制的研究以及防控措施的制定。本研究发现MDV感染后期,宿主细胞IFN-β的产生受到了抑制,表明MDV在感染过程中阻断了 IFN-β信号通路。为了阐明cGAS-STING DNA受体信号通路在MDV诱导IFN-β中的作用,本研究通过RNA干扰技术下调cGAS和STING的表达,发现当两者表达下...
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：88 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 前言
1.1 鸡马立克氏病（MD）及鸡马立克氏病病毒（MDV）
1.1.1 鸡马立克氏病（MD）的流行病学及防控
1.1.2 鸡马立克氏病病毒（MDV）基因组及编码蛋白
1.2 宿主抗病毒天然免疫
1.2.1 TLRs介导的信号转导
1.2.2 RLRs介导的信号转导
1.2.3 DNA受体介导的信号转导
1.3 病毒调控干扰素信号通路逃逸宿主抗病毒天然免疫
1.3.1 病毒蛋白拮抗Ⅰ型干扰素产生
1.3.2 病毒蛋白拮抗Ⅰ型干扰素信号转导
1.3.3 病毒蛋白的亚细胞定位与其干扰素应答拮抗
1.4 MDV调控DNA受体信号通路逃逸宿主抗病毒天然免疫
1.5 本研究目的与意义
第2章 拮抗DNA受体信号通路的MDV蛋白的筛选
2.1 材料和方法
2.1.1 细胞、引物、试剂
2.1.2 RNA抽提及反转录
2.1.3 荧光定量PCR方法的检测
2.1.4 鸡IFN-β的ELISA检测
2.1.5 MDV体外复制动力学曲线的绘制
2.1.6 外源DNA刺激DF1细胞后IFN-β的检测
2.1.7 RNA干扰实验
2.1.8 荧光素酶活性检测
2.2 结果
2.2.1 MDV感染后期,宿主细胞IFN-β产生受到抑制
2.2.2 禽类细胞中存在DNA受体
2.2.3 MDV通过cGAS-STING通路诱导IFN-β的产生
2.2.4 cGAS或STING敲低抑制MDV诱导IFN-β的产生
2.2.5 cGAS- STING双荧光素酶报告系统的建立
2.2.6 拮抗宿主IFN-β产生的MDV病毒蛋白的筛选
2.3 讨论
第3章 MDV VP23蛋白逃逸DNA识别受体信号通路的分子机制
3.1 材料和方法
3.1.1 病毒、细胞及抗体
3.1.2 主要仪器设备
3.1.3 质粒构建
3.1.4 荧光定量PCR
3.1.5 鸡IFN-β的检测
3.1.6 荧光素酶活性检测
3.1.7 RNA干扰实验
3.1.8 VP23稳定表达细胞系的构建
3.1.9 shRNA慢病毒干扰VP23实验
3.1.10 免疫共沉淀与Western blotting实验
3.1.11 激光共聚焦实验
3.1.12 非变性蛋白胶实验
3.2 结果
3.2.1 MDV VP23蛋白抑制cGAS-STING诱导的IFN-β表达
3.2.2 MDV VP23蛋白抑制ISD诱导的IFN-β的产生
3.2.3 VP23抑制病毒DNA触发的IFN-β的产生并促进病毒复制
3.2.4 VP23敲低促进IFN-β的产生并抑制病毒的复制
3.2.5 VP23在转录因子IRF7水平抑制IFN-β表达
3.2.6 VP23阻断IRF7入核
3.2.7 VP23与IRF7之间存在相互作用
3.2.8 VP23竞争性阻断TBK1与IRF7之间的相互作用
3.2.9 VP23与TBK1结合于IRF7的同一结构域
3.3 讨论
全文结论
参考文献
附录
致谢
作者简介
【参考文献】：
期刊论文
[1]应用双重实时荧光定量PCR方法检测鸡马立克氏病血清1型病毒[J]. 张颖,刘长军,秦运安,张艳萍,张晓巍,郝永清. 中国预防兽医学报. 2007(01)
本文编号：3152480
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：88 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 前言
1.1 鸡马立克氏病（MD）及鸡马立克氏病病毒（MDV）
1.1.1 鸡马立克氏病（MD）的流行病学及防控
1.1.2 鸡马立克氏病病毒（MDV）基因组及编码蛋白
1.2 宿主抗病毒天然免疫
1.2.1 TLRs介导的信号转导
1.2.2 RLRs介导的信号转导
1.2.3 DNA受体介导的信号转导
1.3 病毒调控干扰素信号通路逃逸宿主抗病毒天然免疫
1.3.1 病毒蛋白拮抗Ⅰ型干扰素产生
1.3.2 病毒蛋白拮抗Ⅰ型干扰素信号转导
1.3.3 病毒蛋白的亚细胞定位与其干扰素应答拮抗
1.4 MDV调控DNA受体信号通路逃逸宿主抗病毒天然免疫
1.5 本研究目的与意义
第2章 拮抗DNA受体信号通路的MDV蛋白的筛选
2.1 材料和方法
2.1.1 细胞、引物、试剂
2.1.2 RNA抽提及反转录
2.1.3 荧光定量PCR方法的检测
2.1.4 鸡IFN-β的ELISA检测
2.1.5 MDV体外复制动力学曲线的绘制
2.1.6 外源DNA刺激DF1细胞后IFN-β的检测
2.1.7 RNA干扰实验
2.1.8 荧光素酶活性检测
2.2 结果
2.2.1 MDV感染后期,宿主细胞IFN-β产生受到抑制
2.2.2 禽类细胞中存在DNA受体
2.2.3 MDV通过cGAS-STING通路诱导IFN-β的产生
2.2.4 cGAS或STING敲低抑制MDV诱导IFN-β的产生
2.2.5 cGAS- STING双荧光素酶报告系统的建立
2.2.6 拮抗宿主IFN-β产生的MDV病毒蛋白的筛选
2.3 讨论
第3章 MDV VP23蛋白逃逸DNA识别受体信号通路的分子机制
3.1 材料和方法
3.1.1 病毒、细胞及抗体
3.1.2 主要仪器设备
3.1.3 质粒构建
3.1.4 荧光定量PCR
3.1.5 鸡IFN-β的检测
3.1.6 荧光素酶活性检测
3.1.7 RNA干扰实验
3.1.8 VP23稳定表达细胞系的构建
3.1.9 shRNA慢病毒干扰VP23实验
3.1.10 免疫共沉淀与Western blotting实验
3.1.11 激光共聚焦实验
3.1.12 非变性蛋白胶实验
3.2 结果
3.2.1 MDV VP23蛋白抑制cGAS-STING诱导的IFN-β表达
3.2.2 MDV VP23蛋白抑制ISD诱导的IFN-β的产生
3.2.3 VP23抑制病毒DNA触发的IFN-β的产生并促进病毒复制
3.2.4 VP23敲低促进IFN-β的产生并抑制病毒的复制
3.2.5 VP23在转录因子IRF7水平抑制IFN-β表达
3.2.6 VP23阻断IRF7入核
3.2.7 VP23与IRF7之间存在相互作用
3.2.8 VP23竞争性阻断TBK1与IRF7之间的相互作用
3.2.9 VP23与TBK1结合于IRF7的同一结构域
3.3 讨论
全文结论
参考文献
附录
致谢
作者简介
【参考文献】：
期刊论文
[1]应用双重实时荧光定量PCR方法检测鸡马立克氏病血清1型病毒[J]. 张颖,刘长军,秦运安,张艳萍,张晓巍,郝永清. 中国预防兽医学报. 2007(01)
本文编号：3152480
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3152480.html
