ORF3蛋白抑制猪流行性腹泻病毒诱导细胞凋亡的研究
发布时间：2021-04-22 00:05
猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）是目前威胁全世界养猪业的主要肠道病原体之一。PEDV感染新生仔猪,会导致严重的腹泻、脱水和死亡。从2010年开始,PED（porcine epidemic diarrhea）在中国地区大规模爆发,造成了该产业的巨大损失。PEDV属于冠状病毒科α冠状病毒属,拥有约28 kb的单股正链RNA基因组,它的基因组编码病毒复制酶多聚蛋白（pp）la和1ab,棘突（S）,附属蛋白（ORF3）,包膜（E）,膜（M）和核衣壳（N）蛋白。orf3位于PEDV基因组中s基因与e基因之间,编码224个氨基酸约为25 k D的蛋白质。但在细胞适应的PEDV毒株中,ORF3往往会有49个核苷酸的缺失,携带该基因的毒株比较典型的是弱毒的DR13(本研究中命名为DR13att)。关于由orf3基因编码的ORF3蛋白,它的功能研究还比较薄弱。有文献报道PEDV可以引起感染细胞凋亡。在我们前期研究中,发现携带orf3的重组PEDV所致细胞坏死状态要轻于不携带该基因的重组PEDV。因此我们推测ORF3蛋白对于...
【文章来源】：上海海洋大学上海市
【文章页数】：56 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 引言
1.1 猪流行性腹泻病毒
1.1.1 流行病学
1.1.2 PEDV的基因组组成
1.1.3 PEDV的培养特性
1.1.4 PEDV的结构蛋白
1.1.5 ORF3蛋白
1.1.6 诊断
1.1.7 疫苗
1.2 细胞凋亡
1.2.1 细胞凋亡的形态学变化
1.2.2 Caspase
1.2.3 Caspase依赖的细胞凋亡
1.3 病毒与细胞凋亡的关系
1.4 ORF3蛋白的研究进展
1.5 本实验的研究意义及主要内容
第二章 病毒感染及病毒蛋白的表达
2.1 材料
2.1.1 细胞与毒株
2.1.2 主要试剂与仪器
2.2 方法
2.2.1 病毒感染后观察细胞病变
2.2.2 免疫荧光（Immunofluorescence,IFA）
2.3 结果
2.3.1 观察不同PEDV感染造成的细胞病变差异
2.3.2 PEDV感染细胞后病毒S蛋白和ORF3 蛋白的表达情况
2.4 讨论
第三章 ORF3与病毒诱导细胞凋亡的关系
3.1 材料
3.1.1 细胞与毒株
3.1.2 主要试剂与仪器
3.2 原理
3.2.1 细胞凋亡试剂盒检测原理
3.2.2 活细胞成像原理
3.2.3 流式细胞原理
3.2.4 TUNEL原理
3.3 方法
3.3.1 活细胞成像
3.3.2 流式细胞术
3.3.3 TUNEL
3.3.4 SDS-PAGE及 Western blot
3.4 数据分析
3.5 结果
3.5.1 活细胞成像观察分析不同PEDV诱导细胞凋亡情况
3.5.2 流式细胞术分析不同PEDV感染诱导细胞凋亡的差异
3.5.3 TUNEL染色分析不同PEDV感染诱导细胞凋亡的差异
3.5.4 Western blot检测PEDV感染细胞中Caspase蛋白活化
3.6 讨论
第四章 PEDV感染细胞转录组测序及荧光定量PCR验证
4.1 材料
4.1.1 细胞与毒株
4.1.2 主要试剂与仪器
4.2 实验原理
4.2.1 转录组测序原理
4.2.2 荧光定量PCR原理
4.3 方法
4.3.1 转录组测序方法
4.3.2 总RNA提取的方法
4.3.3 荧光定量PCR方法
4.4 结果
4.4.1 转录组测序分析不同PEDV感染细胞的转录组差异
4.4.2 荧光定量PCR结果
4.5 讨论
第五章 全文总结
参考文献
致谢
研究生期间相关科研成果
【参考文献】：
期刊论文
[1]SARS-CoV感染Vero E6细胞诱导细胞凋亡[J]. 鄢然,沈超,雷磊,郑从义,肖庚富,郭德银,朱应,鄢慧民. 中国病毒学. 2003(06)
博士论文
[1]PEDV感染猪空肠组织的蛋白质组学分析及hnRNP A1影响PEDV复制的作用机制研究[D]. 李中华.华中农业大学 2018
本文编号：3152759
【文章来源】：上海海洋大学上海市
【文章页数】：56 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 引言
1.1 猪流行性腹泻病毒
1.1.1 流行病学
1.1.2 PEDV的基因组组成
1.1.3 PEDV的培养特性
1.1.4 PEDV的结构蛋白
1.1.5 ORF3蛋白
1.1.6 诊断
1.1.7 疫苗
1.2 细胞凋亡
1.2.1 细胞凋亡的形态学变化
1.2.2 Caspase
1.2.3 Caspase依赖的细胞凋亡
1.3 病毒与细胞凋亡的关系
1.4 ORF3蛋白的研究进展
1.5 本实验的研究意义及主要内容
第二章 病毒感染及病毒蛋白的表达
2.1 材料
2.1.1 细胞与毒株
2.1.2 主要试剂与仪器
2.2 方法
2.2.1 病毒感染后观察细胞病变
2.2.2 免疫荧光（Immunofluorescence,IFA）
2.3 结果
2.3.1 观察不同PEDV感染造成的细胞病变差异
2.3.2 PEDV感染细胞后病毒S蛋白和ORF3 蛋白的表达情况
2.4 讨论
第三章 ORF3与病毒诱导细胞凋亡的关系
3.1 材料
3.1.1 细胞与毒株
3.1.2 主要试剂与仪器
3.2 原理
3.2.1 细胞凋亡试剂盒检测原理
3.2.2 活细胞成像原理
3.2.3 流式细胞原理
3.2.4 TUNEL原理
3.3 方法
3.3.1 活细胞成像
3.3.2 流式细胞术
3.3.3 TUNEL
3.3.4 SDS-PAGE及 Western blot
3.4 数据分析
3.5 结果
3.5.1 活细胞成像观察分析不同PEDV诱导细胞凋亡情况
3.5.2 流式细胞术分析不同PEDV感染诱导细胞凋亡的差异
3.5.3 TUNEL染色分析不同PEDV感染诱导细胞凋亡的差异
3.5.4 Western blot检测PEDV感染细胞中Caspase蛋白活化
3.6 讨论
第四章 PEDV感染细胞转录组测序及荧光定量PCR验证
4.1 材料
4.1.1 细胞与毒株
4.1.2 主要试剂与仪器
4.2 实验原理
4.2.1 转录组测序原理
4.2.2 荧光定量PCR原理
4.3 方法
4.3.1 转录组测序方法
4.3.2 总RNA提取的方法
4.3.3 荧光定量PCR方法
4.4 结果
4.4.1 转录组测序分析不同PEDV感染细胞的转录组差异
4.4.2 荧光定量PCR结果
4.5 讨论
第五章 全文总结
参考文献
致谢
研究生期间相关科研成果
【参考文献】：
期刊论文
[1]SARS-CoV感染Vero E6细胞诱导细胞凋亡[J]. 鄢然,沈超,雷磊,郑从义,肖庚富,郭德银,朱应,鄢慧民. 中国病毒学. 2003(06)
博士论文
[1]PEDV感染猪空肠组织的蛋白质组学分析及hnRNP A1影响PEDV复制的作用机制研究[D]. 李中华.华中农业大学 2018
本文编号：3152759
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3152759.html
