禽白血病病毒单克隆抗体识别抗原表位的鉴定与分析
发布时间：2021-04-22 06:49
禽白血病（Avian leukosis,AL）是由禽白血病病毒（Avian leukosis virus,ALV）引起的鸡的一种传染性肿瘤性疾病。它在全世界广泛存在,并引起鸡免疫抑制、肿瘤、生长发育迟缓和死亡,每年给家禽业造成巨大经济损失。迄今为止,尚无有效的疫苗或药物针对此病。ALV是一种逆转录病毒,根据致病性和抗体中和特性在鸡群中分为七个亚群（ALV-A/B/C/D/E/J/K）。虽然内源性的ALV-E不引起严重损害,因为其基因组已广泛插入宿主鸡的细胞基因组中,所以它会干扰外源ALV的测定。另外,由于外源ALV的高变异性以及新亚群、新毒株的不断出现,使得检测外源ALV变得越来越困难。目前缺乏针对ALV-A检测的单克隆抗体,而且对其抗原表位也了解甚少。本研究制备出针对ALV-A的单克隆抗体,并鉴定其抗原表位,为单抗的应用提供了科学依据,为建立ALV-A的检测方法提供了新生物材料。本研究首先利用设计的引物从ALV-A-SDAU09C1病毒的全基因组DNA中扩增gp85基因,将其插入pET-32a表达载体中,将构建好的重组质粒导入大肠杆菌中,诱导表达gp85蛋白,并进行纯化。选取健康的6...
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
符号说明
中文摘要
Abstract
1 引言
1.1 禽白血病
1.1.1 禽白血病概述
1.1.2 禽白血病病原学
1.1.3 禽白血病的致病性及危害
1.1.4 禽白血病鉴别诊断
1.1.4.1 组织病理学检查
1.1.4.2 病毒分离和鉴定
1.1.4.3 ELISA法
1.1.4.4 IFA法
1.1.4.5 PCR法
1.1.5 禽白血病预防控制
1.2 禽白血病病毒单克隆抗体及其识别抗原表位
1.2.1 单克隆抗体研制原理概述
1.2.2 单克隆抗体研制应用概述
1.2.3 禽白血病病毒单克隆抗体
1.2.4 禽白血病病毒单克隆抗体应用及其制约因素
1.3 抗原表位
1.3.1 抗原表位概述
1.3.2 抗原表位鉴定及其应用
1.3.3 禽白血病病毒单克隆抗体抗原表位及其特性
1.3.4 禽白血病病毒单克隆抗体抗原表位研究存在的问题
1.4 研究的目的意义
2 材料与方法
2.1 材料
2.1.1 病毒和细胞来源
2.1.2 菌种和载体质粒
2.1.3 引物
2.1.4 主要试剂
2.1.5 实验动物
2.1.6 主要仪器
2.1.7 实验地点
2.2 方法
2.2.1 ALV-A gp85 基因扩增
2.2.2 ALV-A gp85 重组表达质粒构建
2.2.3 ALV-A gp85 分段扩增和表达
2.2.4 ALV-A单克隆抗体制备
2.2.5 ALV-A单克隆抗体特性分析
2.2.6 ALV-A单克隆抗体线性识别抗原表位western blot分析
2.2.7 ALV-A单克隆抗体线性识别抗原表位的ELSIA分析
2.2.8 ALV-A单克隆抗体线性识别抗原表位生物信息分析
2.2.9 ALV-A单克隆抗体介导的IFA
2.3 研究平台
2.4 数据处理与统计分析
3 结果与分析
3.1 ALV-A单克隆抗体制备
3.1.1 ALV-A gp85 蛋白基因的扩增与重组表达质粒的构建
3.1.2 gp85 重组蛋白的诱导表达及纯化
3.1.3 阳性杂交瘤细胞的筛选以及染色体数目的鉴定
3.1.4 腹水的制备
3.1.5 抗体的纯化
3.2 ALV-A单克隆抗体亚类鉴定
3.3 ALV-A单克隆抗体特性分析
3.4 ALV-A单克隆抗体识别抗原表位鉴定
3.5 ALV-A单克隆抗体识别抗原表位的生物信息分析
3.6 ALV-A单克隆抗体介导的IFA
4 讨论
5 结论
6 创新点
参考文献
致谢
攻读学位期间发表论文情况
【参考文献】：
期刊论文
[1]单克隆抗体在抗病毒感染中的研究进展[J]. 卜桐,崔乐乐,刘兆基,张涵旭,史雨,李爱梅,考文萍,翟爱霞. 现代生物医学进展. 2019(06)
[2]单克隆抗体技术的基本原理、改进及应用[J]. 任建委,小扎桑. 高原科学研究. 2018(04)
[3]龙胜凤鸡中一株A亚群禽白血病病毒的基因组分析及其对SPF鸡的致病性研究[J]. 许书珍,王一新,李阳,栾怀彪,崔治中,常爽,赵鹏. 中国预防兽医学报. 2016(09)
[4]禽白血病病毒的亚群和准种多样性及其在不同选择压作用下的演变[J]. 崔治中. 生命科学. 2016(03)
[5]单克隆抗体药物研究新进展[J]. 冯丽亚,李扬,孙文正,杨彬. 细胞与分子免疫学杂志. 2016(03)
[6]单克隆抗体的研究进展[J]. 唐亚华,黄红林. 生物技术世界. 2015(03)
[7]我国地方品种鸡分离到的一个禽白血病病毒新亚群的鉴定[J]. 王鑫,赵鹏,崔治中. 病毒学报. 2012(06)
[8]禽白血病病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立[J]. 贠炳岭,刘文,李德龙,秦立廷,刘在斯,吴关,祁小乐,王永强,高宏雷,王笑梅,高玉龙. 中国兽医科学. 2012(09)
[9]抗原表位鉴定方法的研究进展[J]. 文雪霞,陈化兰,熊永忠,王秀荣. 中国畜牧兽医. 2012(07)
[10]禽白血病抗原快速检测试纸条的研制及初步应用[J]. 梁有志,尹丽萍,杭柏林,钱琨,金文杰,邵红霞,秦爱建. 中国家禽. 2012(14)
博士论文
[1]髓细胞瘤相关A和K亚群禽白血病病毒分离株的生物学特性[D]. 梁雄燕.长江大学 2018
[2]我国地方品系鸡群中ALV的流行病学调查及ALV-K生物学特性的研究[D]. 李阳.山东农业大学 2017
[3]J亚群禽白血病病毒JS09GY3株感染特性及感染鸡法氏囊转录组学分析[D]. 杭柏林.扬州大学 2014
[4]东北地区野生鸟类主要禽免疫抑制病病原感染情况调查及与REV PR相互作用宿主蛋白的筛选[D]. 姜莉莉.东北林业大学 2014
[5]A亚群禽白血病病毒单克隆抗体的制备和不同亚群禽白血病病毒共感染相互影响的研究[D]. 邱玉玉.山东农业大学 2011
[6]A亚群禽白血病病毒不同分离株的基因组和生物学特性比较[D]. 张青婵.山东农业大学 2010
[7]HSP65-HBV多表位融合蛋白乙肝治疗性疫苗的研制[D]. 王华.吉林大学 2006
[8]禽白血病病毒J亚群囊膜糖蛋白基因的生物学和生物化学特性[D]. 秦爱建.扬州大学 1999
硕士论文
[1]A亚群禽白血病病毒（ALV-A）胶体金检测试纸条的研制[D]. 胡卫国.山东农业大学 2019
[2]ALV-A对鸡、鹌鹑的致病性比较及其亚单位疫苗的免疫保护效果[D]. 张忠胜.山东农业大学 2016
[3]A亚群禽白血病病毒gp85囊膜蛋白原核表达及初步应用[D]. 张丹丹.山东农业大学 2015
[4]鸭群中禽白血病病毒的核酸检测[D]. 吕佳泓.山东农业大学 2014
[5]抗番鸭呼肠孤病毒σB蛋白单克隆抗体的制备[D]. 陈晓丹.东北农业大学 2009
本文编号：3153334
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
符号说明
中文摘要
Abstract
1 引言
1.1 禽白血病
1.1.1 禽白血病概述
1.1.2 禽白血病病原学
1.1.3 禽白血病的致病性及危害
1.1.4 禽白血病鉴别诊断
1.1.4.1 组织病理学检查
1.1.4.2 病毒分离和鉴定
1.1.4.3 ELISA法
1.1.4.4 IFA法
1.1.4.5 PCR法
1.1.5 禽白血病预防控制
1.2 禽白血病病毒单克隆抗体及其识别抗原表位
1.2.1 单克隆抗体研制原理概述
1.2.2 单克隆抗体研制应用概述
1.2.3 禽白血病病毒单克隆抗体
1.2.4 禽白血病病毒单克隆抗体应用及其制约因素
1.3 抗原表位
1.3.1 抗原表位概述
1.3.2 抗原表位鉴定及其应用
1.3.3 禽白血病病毒单克隆抗体抗原表位及其特性
1.3.4 禽白血病病毒单克隆抗体抗原表位研究存在的问题
1.4 研究的目的意义
2 材料与方法
2.1 材料
2.1.1 病毒和细胞来源
2.1.2 菌种和载体质粒
2.1.3 引物
2.1.4 主要试剂
2.1.5 实验动物
2.1.6 主要仪器
2.1.7 实验地点
2.2 方法
2.2.1 ALV-A gp85 基因扩增
2.2.2 ALV-A gp85 重组表达质粒构建
2.2.3 ALV-A gp85 分段扩增和表达
2.2.4 ALV-A单克隆抗体制备
2.2.5 ALV-A单克隆抗体特性分析
2.2.6 ALV-A单克隆抗体线性识别抗原表位western blot分析
2.2.7 ALV-A单克隆抗体线性识别抗原表位的ELSIA分析
2.2.8 ALV-A单克隆抗体线性识别抗原表位生物信息分析
2.2.9 ALV-A单克隆抗体介导的IFA
2.3 研究平台
2.4 数据处理与统计分析
3 结果与分析
3.1 ALV-A单克隆抗体制备
3.1.1 ALV-A gp85 蛋白基因的扩增与重组表达质粒的构建
3.1.2 gp85 重组蛋白的诱导表达及纯化
3.1.3 阳性杂交瘤细胞的筛选以及染色体数目的鉴定
3.1.4 腹水的制备
3.1.5 抗体的纯化
3.2 ALV-A单克隆抗体亚类鉴定
3.3 ALV-A单克隆抗体特性分析
3.4 ALV-A单克隆抗体识别抗原表位鉴定
3.5 ALV-A单克隆抗体识别抗原表位的生物信息分析
3.6 ALV-A单克隆抗体介导的IFA
4 讨论
5 结论
6 创新点
参考文献
致谢
攻读学位期间发表论文情况
【参考文献】：
期刊论文
[1]单克隆抗体在抗病毒感染中的研究进展[J]. 卜桐,崔乐乐,刘兆基,张涵旭,史雨,李爱梅,考文萍,翟爱霞. 现代生物医学进展. 2019(06)
[2]单克隆抗体技术的基本原理、改进及应用[J]. 任建委,小扎桑. 高原科学研究. 2018(04)
[3]龙胜凤鸡中一株A亚群禽白血病病毒的基因组分析及其对SPF鸡的致病性研究[J]. 许书珍,王一新,李阳,栾怀彪,崔治中,常爽,赵鹏. 中国预防兽医学报. 2016(09)
[4]禽白血病病毒的亚群和准种多样性及其在不同选择压作用下的演变[J]. 崔治中. 生命科学. 2016(03)
[5]单克隆抗体药物研究新进展[J]. 冯丽亚,李扬,孙文正,杨彬. 细胞与分子免疫学杂志. 2016(03)
[6]单克隆抗体的研究进展[J]. 唐亚华,黄红林. 生物技术世界. 2015(03)
[7]我国地方品种鸡分离到的一个禽白血病病毒新亚群的鉴定[J]. 王鑫,赵鹏,崔治中. 病毒学报. 2012(06)
[8]禽白血病病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立[J]. 贠炳岭,刘文,李德龙,秦立廷,刘在斯,吴关,祁小乐,王永强,高宏雷,王笑梅,高玉龙. 中国兽医科学. 2012(09)
[9]抗原表位鉴定方法的研究进展[J]. 文雪霞,陈化兰,熊永忠,王秀荣. 中国畜牧兽医. 2012(07)
[10]禽白血病抗原快速检测试纸条的研制及初步应用[J]. 梁有志,尹丽萍,杭柏林,钱琨,金文杰,邵红霞,秦爱建. 中国家禽. 2012(14)
博士论文
[1]髓细胞瘤相关A和K亚群禽白血病病毒分离株的生物学特性[D]. 梁雄燕.长江大学 2018
[2]我国地方品系鸡群中ALV的流行病学调查及ALV-K生物学特性的研究[D]. 李阳.山东农业大学 2017
[3]J亚群禽白血病病毒JS09GY3株感染特性及感染鸡法氏囊转录组学分析[D]. 杭柏林.扬州大学 2014
[4]东北地区野生鸟类主要禽免疫抑制病病原感染情况调查及与REV PR相互作用宿主蛋白的筛选[D]. 姜莉莉.东北林业大学 2014
[5]A亚群禽白血病病毒单克隆抗体的制备和不同亚群禽白血病病毒共感染相互影响的研究[D]. 邱玉玉.山东农业大学 2011
[6]A亚群禽白血病病毒不同分离株的基因组和生物学特性比较[D]. 张青婵.山东农业大学 2010
[7]HSP65-HBV多表位融合蛋白乙肝治疗性疫苗的研制[D]. 王华.吉林大学 2006
[8]禽白血病病毒J亚群囊膜糖蛋白基因的生物学和生物化学特性[D]. 秦爱建.扬州大学 1999
硕士论文
[1]A亚群禽白血病病毒（ALV-A）胶体金检测试纸条的研制[D]. 胡卫国.山东农业大学 2019
[2]ALV-A对鸡、鹌鹑的致病性比较及其亚单位疫苗的免疫保护效果[D]. 张忠胜.山东农业大学 2016
[3]A亚群禽白血病病毒gp85囊膜蛋白原核表达及初步应用[D]. 张丹丹.山东农业大学 2015
[4]鸭群中禽白血病病毒的核酸检测[D]. 吕佳泓.山东农业大学 2014
[5]抗番鸭呼肠孤病毒σB蛋白单克隆抗体的制备[D]. 陈晓丹.东北农业大学 2009
本文编号：3153334
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