藏猪甲基转移酶3a基因的SNP筛选及其在精子中的表达分析

发布时间：2021-04-22 16:36

　　为筛选藏猪DNA甲基转移酶3a（Dnmt3a）基因的单核苷酸多态性（SNP）,分析Dnmt3a基因在藏猪精子中的表达水平,采用PCR-直接测序法对藏猪、大白猪、滇南小耳猪Dnmt3a基因进行SNP分析;分别应用实时荧光定量PCR技术、Westen blot方法对藏猪、大白猪精子中Dnmt3a基因的mRNA与蛋白质表达水平进行检测。结果显示,在Dnmt3a基因5′侧翼和第11外显子区发现2个SNP位点,位于藏猪Dnmt3a基因的5′侧翼区起始密码子上游2 012 bp处的SNP（C→T）位点,其杂合度、多态信息含量均较高,表明群体内变异程度大、能提供的遗传信息较多,但该位点不是藏猪特有的SNP;位于藏猪Dnmt3a基因的第11外显子区第1 360 bp处的SNP（C→T）位点,其杂合度、多态信息含量均较低,表明群体内变异程度小、能提供的遗传信息较少。藏猪精子中,Dnmt3a基因mRNA与蛋白质水平上的相对表达量均显著（P<0.05）低于大白猪。以上结果表明,藏猪Dnmt3a基因5′侧翼区起始密码子上游2 012 bp的突变位点可以作为藏猪分子育种中的候选标志;相对于大白猪,Dnmt... 

【文章来源】：河南农业科学. 2020,49(10)北大核心

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 材料
        1.1.1 样品采集及处理
        1.1.2 主要试剂与仪器设备
    1.2 引物设计与合成
    1.3 组织DNA和RNA提取
        1.3.1 DNA提取
        1.3.2 RNA提取及cDNA合成
    1.4 Dnmt3a基因SNP筛选
        1.4.1 PCR扩增
        1.4.2 SNP分析
    1.5 Dnmt3a基因实时荧光定量PCR
        1.5.1 PCR扩增
        1.5.2 标准曲线的制备及实时荧光定量PCR
    1.6 Dnmt3a蛋白表达水平检测
        1.6.1 精子总蛋白质的提取与定量
        1.6.2 Westen blot方法检测Dnmt3a蛋白表达水平
    1.7 数据统计分析
2 结果与分析
    2.1 Dnmt3a基因5′侧翼区与外显子区的SNP筛选
    2.2 藏猪精子中Dnmt3a基因mRNA表达水平
    2.3 藏猪精子中Dnmt3a蛋白表达水平
3 结论与讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]藏猪睾丸DNA甲基化与HIF2α基因mRNA表达水平的相关性[J]. 赵彦玲,张博,王志秀,张红亮,张浩.  中国兽医学报. 2017(11)
[2]犏牛雄性不育的DNA甲基化[J]. 赵彦玲,任子利,李瑜鑫,王建洲,商鹏,强巴央宗.  中国兽医学报. 2017(04)
[3]高原藏猪现状与保种策略[J]. 强巴央宗,谢庄,田发益.  中国畜牧杂志. 2001(06)

博士论文
[1]猪低氧适应相关DNA甲基化位点筛选及表观修饰酶表达分析[D]. 班冬梅.中国农业大学 2014



本文编号：3154103