鹦鹉禽多瘤病毒陕西株VP1基因的克隆及荧光定量PCR检测方法的建立

发布时间：2021-04-23 20:24

　　为了解鹦鹉禽多瘤病毒（APV）陕西分离株（SX-2018株）VP1基因的分子特征,并建立可用于临床的快速灵敏的APV检测方法,本研究通过PCR扩增了SX-2018株VP1基因序列,并与22株国内外参考株进行了核苷酸同源性比较和遗传进化分析。结果显示:扩增的SX-2018株VP1基因全长为1 032 bp,与其他APV分离株核苷酸相似度为99.1%～100.0%;遗传进化分析显示SX-2018株属于CladeⅡ分支。设计针对VP1基因的特异性引物（209 bp）并构建其相应的质粒标准品,以不同浓度的该质粒标准品为模板扩增并绘制了标准曲线,通过条件优化建立了APV SYBR Green荧光定量PCR检测方法。结果显示:建立的荧光定量PCR方法仅特异性扩增APV,与鹦鹉其它常见病毒无交叉反应,特异性强;对质粒标准品检测的最低浓度达5.4×101拷贝/μL,为常规PCR的100倍;组内组间变异系数分别小于0.5%、1.5%,重复性好。利用该方法与常规PCR方法对疑似APV感染的30份样品进行检测并比较,结果显示:建立的APV SYBR Green荧光定量PCR检测方法与常规PCR的符合率为86... 

【文章来源】：中国预防兽医学报. 2020,42(04)北大核心CSCD

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 病毒株和临床样品
    1.2 主要试剂
    1.3 APV VP1基因克隆与序列分析
        1.3.1 VP1基因克隆
        1.3.2 VP1基因序列分析
    1.4 重组质粒标准品的构建与鉴定
    1.5 荧光定量PCR程序优化
    1.6 荧光定量PCR标准曲线的建立
    1.7 特异性试验
    1.8 敏感性试验
    1.9 重复性试验
    1.1 0 临床样品检测
2 结果
    2.1 APV VP1基因克隆与分析
    2.2 重组质粒标准品的构建结果
    2.3 荧光定量PCR程序优化
    2.4 标准曲线的建立
    2.5 特异性试验结果
    2.6 敏感性试验结果
    2.7重复性试验结果
    2.8 临床样品检测
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]鹦鹉幼雏病病毒福建株VP1基因的克隆及序列分析[J]. 万春和,程龙飞,傅光华,施少华,陈红梅,傅秋玲,刘荣昌,林建生,黄瑜.  中国畜牧兽医. 2018(06)
[2]小太阳鹦鹉禽多瘤病毒感染病例分析[J]. 李芳韬,孙洪磊.  国际病毒学杂志. 2017 (04)
[3]青岛即墨鹦鹉幼雏病的诊断及病毒VP1基因序列分析[J]. 蒋文明,庄青叶,马青霞,曹玉飞,侯广宇,刘均华,陈继明,黄保续.  中国动物检疫. 2008(12)
[4]我国一株鹦鹉新病毒的理化性质及鉴定[J]. 夏苇,冯峰,王旭,赵林.  华中师范大学学报(自然科学版). 2000(02)
[5]我国一株鹦鹉病毒的鉴定及其生化特性[J]. 夏苇,冯锋,李天宪,陈绳亮,赵林.  中国病毒学. 1999(03)

硕士论文
[1]禽类多瘤病毒晚期基因表达调控机制的研究[D]. 高奎.中南民族大学 2013
[2]鹦鹉幼雏病病毒全序列分析及VP1基因克隆与表达[D]. 寇铮.华中农业大学 2004



本文编号：3155981