原代奶牛子宫内膜上皮细胞体外培养方法的改进

发布时间：2021-04-24 14:37

　　目前利用奶牛子宫内膜上皮细胞体外培养技术,建立奶牛子宫内膜炎模型从而减少不可控因素来研究奶牛子宫内膜炎疾病已成为国内外普遍使用的一类方法,因此获得高纯度、同一性的子宫内膜上皮细胞是体外研究的关键环节,国内外所使用方法主要是酶消化法、组织块贴壁法和组织块消化贴壁法。本文旨对先前的方法进行改良,建立一种简便易行、培养周期短、细胞活性及形态良好的原代奶牛子宫内膜上皮细胞体外培养技术。采用健康未孕奶牛子宫为试验材料,取下子宫内膜组织,加入5 mL含2%双抗、40%胰酶的DMEM/F12培养基,4℃消化12 h,再将组织移至25 cm²细胞培养瓶中贴壁培养。获得原代细胞后,应用角蛋白-18抗体对细胞进行免疫组化荧光鉴定,并对第3代细胞采用CCK-8法测定不同时间点的D_{450 nm}值,绘制细胞生长曲线。结果显示,培养至第8天,原代细胞基本铺满细胞培养瓶瓶底,有效地缩短了常规组织块贴壁法的周期。通过角蛋白-18免疫组化荧光鉴定,原代上皮细胞的阳性率可达98%以上,相比常规组织块贴壁法来说,纯度明显提高,省去了细胞纯化的操作步骤。细胞增殖状态,符合正常的分裂... 

【文章来源】：中国畜牧兽医. 2020,47(03)北大核心

【文章页数】：7 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 试验动物
        1.1.2 主要试剂
        1.1.3 主要仪器
    1.2 方法
        1.2.1 原代培养
        1.2.2 传代
        1.2.3 鉴定
        1.2.4 生长曲线
        1.2.5 数据分析
2 结 果
    2.1 细胞生长情况
    2.2 细胞传代情况
    2.3 细胞角蛋白-18鉴定情况
    2.4 生长曲线情况
3 讨 论
4 结 论


【参考文献】：
期刊论文
[1]奶牛子宫内膜炎诊疗学研究进展[J]. 王鸿盛,武小虎,张世栋,王东升,严作廷.  中国畜牧兽医. 2019(07)
[2]病原菌分子生物学诊断技术及其在奶牛子宫内膜炎诊断中的应用进展[J]. 邵丹,张世栋,武小虎,王东升,董书伟,桑梦琪,喻琴,严作廷.  动物医学进展. 2019(02)
[3]牛子宫内膜上皮细胞的体外培养及鉴定[J]. 詹同彤,杨健,蔡德霖,王相国,梁鸿斌,谷传慧,倪和民,郭勇.  中国农学通报. 2018(11)
[4]奶牛子宫内膜炎致病菌的分离鉴定、药敏试验及致病力研究[J]. 龚团莲.  畜牧与饲料科学. 2017(06)
[5]人子宫内膜细胞原代培养与间质细胞MTS比较[J]. 李露,史文静,陶爱林,关绮蕙,周龙书.  中国妇幼保健. 2017(01)
[6]奶牛子宫内膜炎病因学研究进展[J]. 那立冬,王东升,董书伟,张世栋,闫宝琪,杨洪早,桑梦琪,严作廷.  动物医学进展. 2016(09)
[7]奶牛子宫内膜上皮细胞体外培养及鉴定[J]. 都日塔哈拉,曹金山,高龙,付长其,郭羽丽.  中国畜牧兽医. 2016(06)
[8]荷斯坦奶牛子宫内膜上皮细胞的体外培养[J]. 张世栋,王东升,王旭荣,潘虎,李宏胜,严作廷.  中国畜牧兽医. 2013(04)
[9]细胞培养技术的应用研究进展[J]. 占今舜,邢月腾,张彬.  饲料博览. 2013(01)
[10]奶牛和绵羊子宫内膜细胞体外培养方法的研究[J]. 陈利平,朴学娇,罗永,倪和民,刘云海,郭勇.  中国农学通报. 2012(14)

博士论文
[1]奶牛子宫内膜炎早期诊断及益生菌抗大肠杆菌诱导的子宫内膜上皮细胞炎性损伤作用机理[D]. 刘明超.中国农业大学 2017



本文编号：3157537