玉米中三种真菌毒素检测方法的研究
发布时间：2021-04-25 10:12
霉菌毒素能够降低饲料的饲喂价值,影响畜禽的生产性能,对动物组织机能、健康产生不利影响,甚至导致畜禽死亡。黄曲霉毒素B1（AFB1）、玉米赤霉烯酮（ZEN）、呕吐毒素（DON）是被大众广泛研究的三种霉菌毒素,也是污染最为普遍的三种毒素。霉菌毒素可以不同的剂量对动物和人的健康造成不同程度的威胁。因此,对于霉菌毒素以及产毒霉菌的检测显得至关重要。目前常用的霉菌毒素检测方法有薄层层析、液相色谱、免疫化学分析等几种方法,主要基于霉菌毒素的理化性质,无法检出己被产毒真菌污染但尚未产毒的高风险样品。多重PCR检测方法,可在单一泳道反应体系中同时检测多个DNA模板或同一模板的不同区域,具有快捷、高效、低成本等优点,被广泛应用于有害微生物检测。本课题调研了我省2012年秋季玉米中黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素的污染情况,对三类霉菌毒素与玉米籽粒水分含量、破损率、霉变率之间的相关性进行了分析。以产毒真菌黄曲霉、镰刀菌的基因组DNA为模板,根据AFB1、ZEN、DON三种毒素生物合成中关键基因的序列设计引物,构建了能够从样品中快速灵敏检测潜藏性产毒真菌的多重PCR检测体系。1)课题从我省各地采集了8...
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
缩略词
中文摘要
Abstract
1 前言
1.1 霉菌毒素
1.1.1 霉菌毒素的发生及分布
1.1.2 常见的霉菌毒素及其生理毒性
1.1.3 霉菌毒素的合成与代谢
1.2 常用的霉菌毒素检测方法
1.2.1 生物学检测技术
1.2.2 物理化学检测方法
1.2.3 免疫学检测方法
1.3 PCR法检测霉菌毒素的研究进展
1.4 mPCR法检测产毒霉菌研究进展
1.5 选题的目的与意义
2 材料与方法
2.1 试验材料
2.1.1 样品
2.1.2 试验主要的试剂
2.1.3 试验主要的仪器及耗材
2.1.4 供试菌株
2.1.5 培养基
2.1.6 质粒及受体菌
2.2 玉米霉菌毒素的检测
2.2.1 黄曲霉毒素B1含量的测定原理
2.2.2 玉米赤霉烯酮含量的测定原理
2.2.3 呕吐毒素含量的测定原理
2.2.4 玉米中各毒素检出和超标判定标准
2.3 玉米中自由水、吸附水、总水含量测定
2.4 玉米籽粒残破率、霉变率测定
2.5 多重PCR法检测玉米中产毒霉菌的研究
2.5.1 真菌DNA的提取
2.5.2 目的基因引物设计与扩增
2.5.3 单基因的PCR扩增特异性和灵敏性分析
2.5.4 PCR目的产物检测
2.5.5 基因片段PCR产物的回收纯化
2.5.6 目的基因的连接、转化及鉴定
2.5.7 大肠杆菌感受态细胞（E.coli DH5α）的制备
2.5.8 普通PCR扩增体系检测玉米中产毒真菌的特异性分析
2.5.9 多重PCR体系的特异性和灵敏性分析
2.6 数据统计分析
3 结果与分析
3.1 新玉米中各种霉菌毒素的污染状况及各毒素相关性的研究
3.1.1 玉米中各种霉菌毒素的污染状况
3.1.2 各种毒素相关性的研究
3.2 玉米中自由水、吸附水、总水含量及与霉菌毒素之间相关性的研究
3.2.1 玉米中自由水、吸附水以及总水分含量分析
3.2.2 玉米中自由水、吸附水、总水含量及与霉菌毒素之间相关性的研究
3.3 玉米籽粒残破率、霉变率及与霉菌毒素、水分含量相关性的研究
3.3.1 玉米籽粒残破率、霉变率分析
3.3.2 玉米籽粒残破率、霉变率及与霉菌毒素、水分含量相关性的分析
3.4 多重PCR法检测玉米中产毒霉菌的研究
3.4.1 普通PCR扩增产毒真菌DNA特异性研究
3.4.2 普通PCR扩增产毒真菌DNA灵敏性研究
3.4.3 普通PCR检测玉米样品中产毒菌株的研究
3.4.4 多重PCR法检测玉米样品中产毒真菌的研究
4 讨论
4.1 新玉米中各种霉菌毒素的污染状况及各毒素相关性的研究
4.1.1 新玉米中各种霉菌毒素的含量
4.1.2 各种霉菌毒素含量的相关性
4.2 玉米中自由水、吸附水、总水含量及与霉菌毒素之间相关性的研究
4.3 玉米籽粒残破率、霉变率及与霉菌毒素、水分含量相关性的研究
4.4 多重PCR法检测玉米中产毒霉菌的研究
5 结论与研究展望
5.1 结论
5.2 课题创新点
5.3 研究展望
参考文献
致谢
本文编号：3159206
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
缩略词
中文摘要
Abstract
1 前言
1.1 霉菌毒素
1.1.1 霉菌毒素的发生及分布
1.1.2 常见的霉菌毒素及其生理毒性
1.1.3 霉菌毒素的合成与代谢
1.2 常用的霉菌毒素检测方法
1.2.1 生物学检测技术
1.2.2 物理化学检测方法
1.2.3 免疫学检测方法
1.3 PCR法检测霉菌毒素的研究进展
1.4 mPCR法检测产毒霉菌研究进展
1.5 选题的目的与意义
2 材料与方法
2.1 试验材料
2.1.1 样品
2.1.2 试验主要的试剂
2.1.3 试验主要的仪器及耗材
2.1.4 供试菌株
2.1.5 培养基
2.1.6 质粒及受体菌
2.2 玉米霉菌毒素的检测
2.2.1 黄曲霉毒素B1含量的测定原理
2.2.2 玉米赤霉烯酮含量的测定原理
2.2.3 呕吐毒素含量的测定原理
2.2.4 玉米中各毒素检出和超标判定标准
2.3 玉米中自由水、吸附水、总水含量测定
2.4 玉米籽粒残破率、霉变率测定
2.5 多重PCR法检测玉米中产毒霉菌的研究
2.5.1 真菌DNA的提取
2.5.2 目的基因引物设计与扩增
2.5.3 单基因的PCR扩增特异性和灵敏性分析
2.5.4 PCR目的产物检测
2.5.5 基因片段PCR产物的回收纯化
2.5.6 目的基因的连接、转化及鉴定
2.5.7 大肠杆菌感受态细胞（E.coli DH5α）的制备
2.5.8 普通PCR扩增体系检测玉米中产毒真菌的特异性分析
2.5.9 多重PCR体系的特异性和灵敏性分析
2.6 数据统计分析
3 结果与分析
3.1 新玉米中各种霉菌毒素的污染状况及各毒素相关性的研究
3.1.1 玉米中各种霉菌毒素的污染状况
3.1.2 各种毒素相关性的研究
3.2 玉米中自由水、吸附水、总水含量及与霉菌毒素之间相关性的研究
3.2.1 玉米中自由水、吸附水以及总水分含量分析
3.2.2 玉米中自由水、吸附水、总水含量及与霉菌毒素之间相关性的研究
3.3 玉米籽粒残破率、霉变率及与霉菌毒素、水分含量相关性的研究
3.3.1 玉米籽粒残破率、霉变率分析
3.3.2 玉米籽粒残破率、霉变率及与霉菌毒素、水分含量相关性的分析
3.4 多重PCR法检测玉米中产毒霉菌的研究
3.4.1 普通PCR扩增产毒真菌DNA特异性研究
3.4.2 普通PCR扩增产毒真菌DNA灵敏性研究
3.4.3 普通PCR检测玉米样品中产毒菌株的研究
3.4.4 多重PCR法检测玉米样品中产毒真菌的研究
4 讨论
4.1 新玉米中各种霉菌毒素的污染状况及各毒素相关性的研究
4.1.1 新玉米中各种霉菌毒素的含量
4.1.2 各种霉菌毒素含量的相关性
4.2 玉米中自由水、吸附水、总水含量及与霉菌毒素之间相关性的研究
4.3 玉米籽粒残破率、霉变率及与霉菌毒素、水分含量相关性的研究
4.4 多重PCR法检测玉米中产毒霉菌的研究
5 结论与研究展望
5.1 结论
5.2 课题创新点
5.3 研究展望
参考文献
致谢
本文编号：3159206
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3159206.html
