猪细小病毒、猪圆环病毒病Ⅱ型和副猪嗜血杆菌SYBR Green Ⅰ多重荧光定量PCR检测方法的建立
发布时间：2021-04-25 17:24
近年来,随着养猪业的发展,与之伴随的疾病也越来越复杂。猪细小病毒（porcine parvovirus,PPV）和猪圆环病毒2型（porcine circovirus type 2,PCV2）在临床养殖过程中常出现混合感染,且PCV2感染后会使猪产生免疫抑制,容易激发或并发其他传染病原,副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis,Hps）是一种典型的“机会主义”病原,常作为继发病原伴随PCV2导致混合感染。准确而快速的诊断这几种病原,从而提供针对性的治疗,对养猪业的健康发展意义重大。荧光定量PCR检测技术具有灵敏度高、特异性强、快速、简便、能定量等优点,广泛应用于病原诊断。本研究拟建立一种三重实时定量PCR检测方法,并结合熔解曲线分析,实现对PPV、PCV2和Hps单独或混合感染的快速诊断。为此,做了以下研究:（一）分别建立了PPV,PCV2,Hps的荧光定量PCR检测方法。根据PPV的VP2基因、PCV2的cap基因和Hps的infB基因保守区域设计特异性引物,并将扩增片段克隆载体后构建质粒标准品。以不同稀释度的标准品为模板进行SYBR GreenΙ荧光定量PCR扩增并制...
【文章来源】：河南科技学院河南省
【文章页数】：89 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
缩略语表
摘要
Abstract
第一章 文献综述
1 前言
2 猪细小病毒简介及检测方法研究进展
2.1 病原学特点
2.2 流行病学特点
2.3 检测方法
3 猪圆环病毒Ⅱ型及其诊断方法研究进展
3.1 病原学特点
3.2 流行病学特点
3.3 诊断方法
4 副猪嗜血杆菌病检测方法研究进展
4.1 病原学特点
4.2 流行病学特点
4.3 检测方法
第二章 猪细小病毒、猪圆环病毒2 型和副猪嗜血杆菌SYBR GreenΙ实时荧光定量PCR检测方法的建立
1 材料与方法
1.1 材料
1.2 方法
2 结果
2.1 阳性质粒的构建
2.2 反应条件优化结果
2.3 荧光定量PCR标准曲线的建立
2.4 扩增产物熔解曲线分析
2.5 特异性检测
2.6 重复性试验结果
2.7 敏感性检验
2.8 病料检测
3 讨论
4 小结
第三章 猪细小病毒与猪圆环病毒Ⅱ型双重SYBR Green Ⅰ实时PCR检测方法的建立
1 材料与方法
1.1 材料
1.2 方法
2 结果
2.1 体系优化结果
2.2 熔解曲线分析
2.3 特异性检测
2.4 重复性试验结果
2.5 敏感性检验
2.6 临床样品检测
3 讨论
4 小结
第四章 猪细小病毒与副猪嗜血杆菌双重SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立
1 材料与方法
1.1 材料
1.2 方法
2 结果
2.1 体系优化结果
2.2 熔解曲线分析
2.3 特异性检测
2.4 重复性试验结果
2.5 敏感性检验
2.6 临床样品检测
3 讨论
4 小结
第五章 猪圆环病毒Ⅱ型与副猪嗜血杆菌双重SYBR Green Ⅰ实时PCR检测方法的建立
1 材料与方法
1.1 材料
1.2 方法
2 结果
2.1 体系优化结果
2.2 熔解曲线分析
2.3 特异性检测
2.4 重复性试验结果
2.5 敏感性检验
2.6 临床样品检测
3 讨论
4 小结
第六章 猪细小病毒、猪圆环病毒Ⅱ型和副猪嗜血杆菌三重SYBR Green Ⅰ实时PCR检测方法的建立
1 材料与方法
1.1 材料
1.2 方法
2 结果
2.1 体系优化结果
2.2 熔解曲线分析
2.3 特异性检测
2.4 重复性试验结果
2.5 敏感性检验
2.6 临床样品检测
3 讨论
4 小结
全文总结
参考文献
附件
附件（A）
附件（B）
附件（C）
附件（D）
致谢
导师简介
作者简介
攻读学位期间取得的研究成果
【参考文献】：
期刊论文
[1]猪蓝耳病毒、猪圆环病毒2型与副猪嗜血杆菌混合感染的实验室诊断及血清抗体检测[J]. 宋宏立,崔欢,张诚. 黑龙江畜牧兽医. 2019(23)
[2]一例猪伪狂犬病与副猪嗜血杆菌病混感的诊治[J]. 何碧柔. 畜牧兽医科技信息. 2019(11)
[3]2017年我国规模化猪场副猪嗜血杆菌流行病学调查[J]. 郭龙,宋文博,贾双,袁意,陈翔鸿,喻红艳,汤细彪. 中国兽医学报. 2019(11)
[4]猪细小病毒7型SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立及临床样品的检测[J]. 赵冠宇,解长占,孙文超,张赫,那少龙,李卓昕,张涵,李成辉,哈卓,李金凤,韩继成,南福龙,庄忻雨,张英,金宁一. 中国兽医学报. 2019(10)
[5]荧光原位杂交在布鲁氏菌和牛结核分枝杆菌检测中的应用[J]. 孙明军,王萍,张喜悦,孙翔翔,孙世雄,魏荣. 中国动物检疫. 2019(09)
[6]猪细小病毒生物学研究进展[J]. 陈玉梅,马丽萍,周景明. 河南农业科学. 2019(11)
[7]猪圆环病毒病的防治[J]. 王克. 养殖与饲料. 2019(09)
[8]猪圆环病毒2型抗体胶体金免疫层析检测方法的建立[J]. 张禹,张韵,孙世琪,马小军,张小丽,郭慧琛. 中国预防兽医学报. 2019(07)
[9]猪繁殖与呼吸综合征病毒与副猪嗜血杆菌混合感染的诊断[J]. 张海龙,陈盛楠,谢博,李丽,黄良宗. 中国畜牧兽医. 2019(06)
[10]猪细小病毒病的流行病学、临床症状、诊断与防控[J]. 张君. 现代畜牧科技. 2019(05)
博士论文
[1]副猪嗜血杆菌群体基因组测序、分子分型和耐药性研究[D]. 马丽娜.中国农业科学院 2017
[2]高分辨率熔解曲线（HRM）技术在动物病毒基因分型中的研究及应用[D]. 嘎利兵嘎.中国农业大学 2015
[3]副猪嗜血杆菌毒力因子筛选和capD基因功能研究及致脑膜炎大肠杆菌突破血脑屏障的分子机制研究[D]. 王湘如.华中农业大学 2014
[4]猪伪狂犬病毒、细小病毒和圆环病毒2型多重SYBR Green Ⅰ实时PCR检测方法的建立[D]. 李明凤.河南农业大学 2009
硕士论文
[1]猪圆环病毒2型抗原抗体荧光微球免疫层析快速检测方法的建立与应用[D]. 柳亚茹.山东农业大学 2019
[2]不同毒力副猪嗜血杆菌转录组测序及毒力相关基因的差异分析[D]. 王超.沈阳农业大学 2018
[3]猪细小病毒与副猪嗜血杆菌基因芯片同步检测技术的研究[D]. 赵迪.河南农业大学 2017
[4]基于LAMP和荧光定量PCR技术的猪圆环病毒2型和猪细小病毒检测试剂盒的研制[D]. 胡瑞丽.上海师范大学 2016
[5]猪圆环病毒2型Cap基因工程疫苗的研制[D]. 李芳.山东农业大学 2014
[6]猪细小病毒的分离鉴定及NS1/VP2基因遗传进化分析[D]. 何学峰.华中农业大学 2012
[7]猪圆环病毒2型和副猪嗜血杆菌二联灭活疫苗的研制与免疫效力研究[D]. 徐蓉.南京农业大学 2012
[8]猪圆环病毒2型和副猪嗜血杆菌4型混合感染致病性研究[D]. 刘淑清.华中农业大学 2011
[9]几种主要的猪病毒性疾病多重SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的研究[D]. 韩志涛.河南农业大学 2011
[10]猪圆环病毒2型与副猪嗜血杆菌混合感染昆明小鼠的病理学研究[D]. 潘荞.湖南农业大学 2010
本文编号：3159787
【文章来源】：河南科技学院河南省
【文章页数】：89 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
缩略语表
摘要
Abstract
第一章 文献综述
1 前言
2 猪细小病毒简介及检测方法研究进展
2.1 病原学特点
2.2 流行病学特点
2.3 检测方法
3 猪圆环病毒Ⅱ型及其诊断方法研究进展
3.1 病原学特点
3.2 流行病学特点
3.3 诊断方法
4 副猪嗜血杆菌病检测方法研究进展
4.1 病原学特点
4.2 流行病学特点
4.3 检测方法
第二章 猪细小病毒、猪圆环病毒2 型和副猪嗜血杆菌SYBR GreenΙ实时荧光定量PCR检测方法的建立
1 材料与方法
1.1 材料
1.2 方法
2 结果
2.1 阳性质粒的构建
2.2 反应条件优化结果
2.3 荧光定量PCR标准曲线的建立
2.4 扩增产物熔解曲线分析
2.5 特异性检测
2.6 重复性试验结果
2.7 敏感性检验
2.8 病料检测
3 讨论
4 小结
第三章 猪细小病毒与猪圆环病毒Ⅱ型双重SYBR Green Ⅰ实时PCR检测方法的建立
1 材料与方法
1.1 材料
1.2 方法
2 结果
2.1 体系优化结果
2.2 熔解曲线分析
2.3 特异性检测
2.4 重复性试验结果
2.5 敏感性检验
2.6 临床样品检测
3 讨论
4 小结
第四章 猪细小病毒与副猪嗜血杆菌双重SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立
1 材料与方法
1.1 材料
1.2 方法
2 结果
2.1 体系优化结果
2.2 熔解曲线分析
2.3 特异性检测
2.4 重复性试验结果
2.5 敏感性检验
2.6 临床样品检测
3 讨论
4 小结
第五章 猪圆环病毒Ⅱ型与副猪嗜血杆菌双重SYBR Green Ⅰ实时PCR检测方法的建立
1 材料与方法
1.1 材料
1.2 方法
2 结果
2.1 体系优化结果
2.2 熔解曲线分析
2.3 特异性检测
2.4 重复性试验结果
2.5 敏感性检验
2.6 临床样品检测
3 讨论
4 小结
第六章 猪细小病毒、猪圆环病毒Ⅱ型和副猪嗜血杆菌三重SYBR Green Ⅰ实时PCR检测方法的建立
1 材料与方法
1.1 材料
1.2 方法
2 结果
2.1 体系优化结果
2.2 熔解曲线分析
2.3 特异性检测
2.4 重复性试验结果
2.5 敏感性检验
2.6 临床样品检测
3 讨论
4 小结
全文总结
参考文献
附件
附件（A）
附件（B）
附件（C）
附件（D）
致谢
导师简介
作者简介
攻读学位期间取得的研究成果
【参考文献】：
期刊论文
[1]猪蓝耳病毒、猪圆环病毒2型与副猪嗜血杆菌混合感染的实验室诊断及血清抗体检测[J]. 宋宏立,崔欢,张诚. 黑龙江畜牧兽医. 2019(23)
[2]一例猪伪狂犬病与副猪嗜血杆菌病混感的诊治[J]. 何碧柔. 畜牧兽医科技信息. 2019(11)
[3]2017年我国规模化猪场副猪嗜血杆菌流行病学调查[J]. 郭龙,宋文博,贾双,袁意,陈翔鸿,喻红艳,汤细彪. 中国兽医学报. 2019(11)
[4]猪细小病毒7型SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立及临床样品的检测[J]. 赵冠宇,解长占,孙文超,张赫,那少龙,李卓昕,张涵,李成辉,哈卓,李金凤,韩继成,南福龙,庄忻雨,张英,金宁一. 中国兽医学报. 2019(10)
[5]荧光原位杂交在布鲁氏菌和牛结核分枝杆菌检测中的应用[J]. 孙明军,王萍,张喜悦,孙翔翔,孙世雄,魏荣. 中国动物检疫. 2019(09)
[6]猪细小病毒生物学研究进展[J]. 陈玉梅,马丽萍,周景明. 河南农业科学. 2019(11)
[7]猪圆环病毒病的防治[J]. 王克. 养殖与饲料. 2019(09)
[8]猪圆环病毒2型抗体胶体金免疫层析检测方法的建立[J]. 张禹,张韵,孙世琪,马小军,张小丽,郭慧琛. 中国预防兽医学报. 2019(07)
[9]猪繁殖与呼吸综合征病毒与副猪嗜血杆菌混合感染的诊断[J]. 张海龙,陈盛楠,谢博,李丽,黄良宗. 中国畜牧兽医. 2019(06)
[10]猪细小病毒病的流行病学、临床症状、诊断与防控[J]. 张君. 现代畜牧科技. 2019(05)
博士论文
[1]副猪嗜血杆菌群体基因组测序、分子分型和耐药性研究[D]. 马丽娜.中国农业科学院 2017
[2]高分辨率熔解曲线（HRM）技术在动物病毒基因分型中的研究及应用[D]. 嘎利兵嘎.中国农业大学 2015
[3]副猪嗜血杆菌毒力因子筛选和capD基因功能研究及致脑膜炎大肠杆菌突破血脑屏障的分子机制研究[D]. 王湘如.华中农业大学 2014
[4]猪伪狂犬病毒、细小病毒和圆环病毒2型多重SYBR Green Ⅰ实时PCR检测方法的建立[D]. 李明凤.河南农业大学 2009
硕士论文
[1]猪圆环病毒2型抗原抗体荧光微球免疫层析快速检测方法的建立与应用[D]. 柳亚茹.山东农业大学 2019
[2]不同毒力副猪嗜血杆菌转录组测序及毒力相关基因的差异分析[D]. 王超.沈阳农业大学 2018
[3]猪细小病毒与副猪嗜血杆菌基因芯片同步检测技术的研究[D]. 赵迪.河南农业大学 2017
[4]基于LAMP和荧光定量PCR技术的猪圆环病毒2型和猪细小病毒检测试剂盒的研制[D]. 胡瑞丽.上海师范大学 2016
[5]猪圆环病毒2型Cap基因工程疫苗的研制[D]. 李芳.山东农业大学 2014
[6]猪细小病毒的分离鉴定及NS1/VP2基因遗传进化分析[D]. 何学峰.华中农业大学 2012
[7]猪圆环病毒2型和副猪嗜血杆菌二联灭活疫苗的研制与免疫效力研究[D]. 徐蓉.南京农业大学 2012
[8]猪圆环病毒2型和副猪嗜血杆菌4型混合感染致病性研究[D]. 刘淑清.华中农业大学 2011
[9]几种主要的猪病毒性疾病多重SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的研究[D]. 韩志涛.河南农业大学 2011
[10]猪圆环病毒2型与副猪嗜血杆菌混合感染昆明小鼠的病理学研究[D]. 潘荞.湖南农业大学 2010
本文编号：3159787
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