基于噬菌体展示结合肽和纳米探针的结核杆菌检测新方法研究

发布时间：2021-04-25 21:37

　　目的：利用噬菌体展示随机环七肽文库进行筛选获得结核分枝杆菌MTB特异性结合肽，并初步鉴定其与MTB的结合能力；将筛选获得的结合肽与纳米磁珠和荧光量子点偶联，建立免疫磁珠荧光量子点技术检测MTB的新方法。方法：噬菌体筛选以MTB标准株H37Rv灭活菌体为靶分子，按吸附、洗脱、扩增的生物淘选（简称淘选）过程对噬菌体展示随机环七肽文库进行筛选，并于第2至第4轮的筛选中加入BCG灭活菌体进行反筛，4轮淘选后，从滴度测定平板上各个方位挑取H37Rv和BCG结合单噬菌体各28和27个进行扩增纯化，提取单链DNA进行测序，间接ELISA法检测不同单噬菌体与H3Rv、BCG和3种非分枝杆菌（铜绿假单胞菌、大肠杆菌和白色念珠菌）的结合活性，鉴定出阳性克隆。将阳性单噬菌体所表达的展示肽体外合成并标记荧光，荧光显微镜观察其与19种分枝杆菌标准株的结合活性；流式细胞仪检测四种合成环肽与H37Rv和BCG的结合活性。利用湿化学方法制备纳米磁珠和荧光量子点，将本室前期筛选获得的MTB特异性结合线性七肽H8以及购买的抗MTB多克隆抗体（Pab）偶联纳米磁珠，获得2种免疫磁珠MNP-H8和MNP-Pab，将H8、抗M... 

【文章来源】：苏州大学江苏省

【文章页数】：73 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
Abstract
引言
第一部分 结核分枝杆菌菌体结合肽的筛选
    材料和方法
    结果
    讨论
第二部分 免疫磁珠荧光量子点技术检测结核分枝杆菌的方法学研究和初步评估
    材料和方法
    结果
    讨论
结论
参考文献
综述 纳米技术在结核病实验室诊断和治疗中的研究进展
    参考文献
攻读学位期间本人出版或公开发表的论著、论文及申请专利
中英文缩略词表
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]加强结核病耐药性检测新技术研究迫在眉睫[J]. 郑瑞娟,胡忠义.  中华预防医学杂志. 2011 (01)
[2]结核特异性抗体结合肽的筛选研究[J]. 杨焕森,胡忠义,刘忠华,王洁,沙巍,杨华.  中华预防医学杂志. 2011 (01)
[3]结核分枝杆菌分泌蛋白64抗原模拟表位的筛选研究[J]. 张丽婷,胡忠义,李连青,刘忠华,秦莲花,蔡江丽,杨华.  中华结核和呼吸杂志. 2010 (05)
[4]The Escherichia coli O157:H7 DNA detection on a gold nanoparticle-enhanced piezoelectric biosensor[J]. WANG LiJiang1, WEI QingShan2, WU ChunSheng1, HU ZhaoYing1, JI Jian2 & WANG Ping1↑ 1 Biosensor National Special Laboratory and Key Laboratory of Biomedical Engineering of Ministry of Education, Department of Biomedical Engineering, Zhejiang University, Hangzhou 310027, China; 2 Key Laboratory of Macromolecule Synthesis and Functionalization of Ministry of Education, Zhejiang University, Hangzhou 310027, China.  Chinese Science Bulletin. 2008(08)
[5]噬菌体生物扩增法检测结核分枝杆菌及其耐药性方法评价[J]. 胡忠义.  中华检验医学杂志. 2007(07)
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本文编号：3160138