布鲁菌外膜蛋白Omp2a的表达纯化及分泌特异抗体杂交瘤细胞株的建立
发布时间：2021-04-26 07:19
布鲁菌病（Brucellosis）是由革兰氏阴性、胞内寄生菌布鲁菌（Brucella）引起的一种人兽共患传染病，主要引起患病动物不孕、流产和死胎,对动物养殖业造成了巨大的经济损失，并且严重威胁到了人类的生命健康。多年来，学者们对布鲁菌外膜蛋白的研究发现，其主要外膜蛋白具有免疫原性和抗原保护性。布鲁菌外膜蛋白Omp2a属于第二组外膜蛋白，是菌体表面一种孔道蛋白，而第二组外膜蛋白构成了布鲁菌细胞的渗透系统，可以引起机体的体液和细胞免疫反应。为了研究出一种新型的能够快速准确检测布鲁菌病的诊断方法，本实验通过表达、纯化布鲁菌外膜蛋白Omp2a、免疫小鼠、细胞融合和筛选等最终获得了能够分泌其特异性抗体的杂交瘤细胞株。1.通过将已经构建成功的带有GST标签的pGEX-4T-1原核表达载体连接、转化后表达布鲁菌外膜蛋白Omp2a融合蛋白，使用了两种方法对融合蛋白进行了纯化。2.用纯化的布鲁菌外膜蛋白Omp2a按照一定免疫程序定期免疫Balb/c小鼠，得到能够产生抗体的免疫脾细胞。间接ELISA方法检测免疫小鼠体内血清抗体效价，达到最低标准1∶1×105时进行细胞融合。3.通过细胞融合、筛选得到3株能...
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：37 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 布鲁菌及其外膜蛋白研究进展
1.1 布鲁菌病
1.2 布鲁菌外膜蛋白
1.2.1 第一组外膜蛋白
1.2.2 第二组外膜蛋白
1.2.3 第三组外膜蛋白
1.3 布鲁菌病诊断及检测方法
1.3.1 细菌学诊断
1.3.2 血清学诊断方法
1.3.3 分子学方法
本研究的目的和意义
第二章 布鲁菌外膜蛋白 Omp2a 的表达及纯化
2.1 材料与方法
2.1.1 材料及仪器设备
2.1.2 方法
2.1.2.1 布鲁菌外膜蛋白 Omp2a 的表达
2.1.2.2 布鲁菌外膜蛋白 Omp2a 的纯化
2.2 结果与分析
2.2.1 布鲁菌外膜蛋白 Omp2a 的表达及可溶性鉴定
2.2.2 布鲁菌外膜蛋白 Omp2a 的纯化
2.2.2.1 电洗脱法纯化
2.2.2.2 GST 层析柱纯化
2.3 讨论
第三章 分泌抗布鲁菌外膜蛋白 Omp2a 特异性抗体的杂交瘤细胞株的建立
3.1 材料和方法
3.1.1 主要材料
3.1.2 杂交瘤细胞株的建立
3.1.2.1 所需试剂配制
3.1.2.2 免疫小鼠
3.1.2.3 间接 ELISA 法检测小鼠血清抗体效价
3.1.2.4 SP2/0 骨髓瘤细胞的准备
3.1.2.5 饲养层细胞的制备
3.1.2.6 小鼠免疫脾细胞的制备
3.1.2.7 细胞融合
3.1.2.8 杂交瘤细胞的筛选
3.2 结果与分析
3.2.1 小鼠免疫及血清抗体效价检测
3.2.2 细胞融合
3.2.3 杂交瘤细胞的筛选
3.3 讨论
结论
参考文献
附录
致谢
作者简介
【参考文献】：
期刊论文
[1]布鲁氏菌病的流行特点及防控[J]. 卢贤建. 中国畜禽种业. 2013(08)
[2]Taqman MGB探针实时荧光定量PCR检测布鲁菌病的研究[J]. 刘艳红,王清. 现代预防医学. 2013(07)
[3]多重荧光定量PCR方法鉴定布鲁氏菌属及牛羊种布鲁氏菌研究[J]. 刘志国,罗成旺,张利,姜海,赵鸿雁,朴东日,田国忠,崔步云. 中国人兽共患病学报. 2012(09)
[4]猪型布鲁氏菌Omp31基因的抗原表位预测与分析[J]. 杜志强,刘丽娜,王建英. 云南农业大学学报(自然科学). 2012(05)
[5]布鲁氏菌的致病机制与细胞免疫机制研究进展[J]. 董炳梅,王金良,唐娜,苗立中,沈志强. 中国人兽共患病学报. 2012(06)
[6]布鲁菌Cycling探针荧光定量PCR检测方法的建立[J]. 许邹亮,南文龙,陆明哲,周洁,谭鹏飞,陈义平,毛开荣. 中国兽医杂志. 2012(02)
[7]布鲁氏菌外膜蛋白的研究进展[J]. 胡剑飞,崔步云,关平原,刘志国. 疾病监测. 2010(05)
[8]布鲁菌病的实验室检测方法[J]. 辛梅平,林瑞生,王君. 中国医药指南. 2010(14)
[9]胶体金免疫层析法在布鲁氏菌病监测地区的现场应用[J]. 邵丰尧,朱匡纪,朱明东. 疾病监测. 2009(10)
[10]多重PCR特异检测布鲁氏菌方法的建立[J]. 杜昕颖,陈泽良,王玉飞,乔凤,赵瑾,苑锡铜,黄留玉. 解放军预防医学杂志. 2008(05)
博士论文
[1]动物布鲁氏菌快速检测方法的研究[D]. 李建云.内蒙古农业大学 2012
硕士论文
[1]布鲁氏菌主要外膜蛋白基因的克隆、表达及蛋白纯化[D]. 杨磊.西北农林科技大学 2013
本文编号：3160992
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：37 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 布鲁菌及其外膜蛋白研究进展
1.1 布鲁菌病
1.2 布鲁菌外膜蛋白
1.2.1 第一组外膜蛋白
1.2.2 第二组外膜蛋白
1.2.3 第三组外膜蛋白
1.3 布鲁菌病诊断及检测方法
1.3.1 细菌学诊断
1.3.2 血清学诊断方法
1.3.3 分子学方法
本研究的目的和意义
第二章 布鲁菌外膜蛋白 Omp2a 的表达及纯化
2.1 材料与方法
2.1.1 材料及仪器设备
2.1.2 方法
2.1.2.1 布鲁菌外膜蛋白 Omp2a 的表达
2.1.2.2 布鲁菌外膜蛋白 Omp2a 的纯化
2.2 结果与分析
2.2.1 布鲁菌外膜蛋白 Omp2a 的表达及可溶性鉴定
2.2.2 布鲁菌外膜蛋白 Omp2a 的纯化
2.2.2.1 电洗脱法纯化
2.2.2.2 GST 层析柱纯化
2.3 讨论
第三章 分泌抗布鲁菌外膜蛋白 Omp2a 特异性抗体的杂交瘤细胞株的建立
3.1 材料和方法
3.1.1 主要材料
3.1.2 杂交瘤细胞株的建立
3.1.2.1 所需试剂配制
3.1.2.2 免疫小鼠
3.1.2.3 间接 ELISA 法检测小鼠血清抗体效价
3.1.2.4 SP2/0 骨髓瘤细胞的准备
3.1.2.5 饲养层细胞的制备
3.1.2.6 小鼠免疫脾细胞的制备
3.1.2.7 细胞融合
3.1.2.8 杂交瘤细胞的筛选
3.2 结果与分析
3.2.1 小鼠免疫及血清抗体效价检测
3.2.2 细胞融合
3.2.3 杂交瘤细胞的筛选
3.3 讨论
结论
参考文献
附录
致谢
作者简介
【参考文献】：
期刊论文
[1]布鲁氏菌病的流行特点及防控[J]. 卢贤建. 中国畜禽种业. 2013(08)
[2]Taqman MGB探针实时荧光定量PCR检测布鲁菌病的研究[J]. 刘艳红,王清. 现代预防医学. 2013(07)
[3]多重荧光定量PCR方法鉴定布鲁氏菌属及牛羊种布鲁氏菌研究[J]. 刘志国,罗成旺,张利,姜海,赵鸿雁,朴东日,田国忠,崔步云. 中国人兽共患病学报. 2012(09)
[4]猪型布鲁氏菌Omp31基因的抗原表位预测与分析[J]. 杜志强,刘丽娜,王建英. 云南农业大学学报(自然科学). 2012(05)
[5]布鲁氏菌的致病机制与细胞免疫机制研究进展[J]. 董炳梅,王金良,唐娜,苗立中,沈志强. 中国人兽共患病学报. 2012(06)
[6]布鲁菌Cycling探针荧光定量PCR检测方法的建立[J]. 许邹亮,南文龙,陆明哲,周洁,谭鹏飞,陈义平,毛开荣. 中国兽医杂志. 2012(02)
[7]布鲁氏菌外膜蛋白的研究进展[J]. 胡剑飞,崔步云,关平原,刘志国. 疾病监测. 2010(05)
[8]布鲁菌病的实验室检测方法[J]. 辛梅平,林瑞生,王君. 中国医药指南. 2010(14)
[9]胶体金免疫层析法在布鲁氏菌病监测地区的现场应用[J]. 邵丰尧,朱匡纪,朱明东. 疾病监测. 2009(10)
[10]多重PCR特异检测布鲁氏菌方法的建立[J]. 杜昕颖,陈泽良,王玉飞,乔凤,赵瑾,苑锡铜,黄留玉. 解放军预防医学杂志. 2008(05)
博士论文
[1]动物布鲁氏菌快速检测方法的研究[D]. 李建云.内蒙古农业大学 2012
硕士论文
[1]布鲁氏菌主要外膜蛋白基因的克隆、表达及蛋白纯化[D]. 杨磊.西北农林科技大学 2013
本文编号：3160992
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