区分犬瘟热病毒Asia-Ⅰ型野毒株及疫苗株的AS-PCR方法

发布时间：2021-04-29 01:59

　　犬瘟热是一种接触性传染病,可侵害免疫系统、呼吸系统、消化系统,甚至神经系统,导致全身性的病理变化,对宠物犬、毛皮动物等存在巨大威胁。目前常用的胶体金检测法不能有效区分疫苗免疫与动物自然感染。为建立一种高效准确的鉴别犬瘟热病毒野毒株和疫苗株的检测方法,本试验对从武汉地区收集已确诊犬瘟热的6只犬分离得到的野毒株以及3株广泛使用的CDV疫苗株进行全基因组测序,从氨基酸水平和碱基水平比对分析后,确定H基因为AS-PCR引物设计的靶基因。通过对H基因进行分型,发现武汉地区流行的CDV均为Asia-Ⅰ型,而疫苗株Y2为America-I型,疫苗株Y1和Y3均为America-II型。对比179株Asia-Ⅰ型（6株野毒株样品+173株GenBank Asia-Ⅰ型）与3株疫苗株的CDV-H基因序列,采用AS-PCR技术（3′端错配）设计出1对能有效区分犬瘟热Asia-Ⅰ型野毒株和疫苗株的特异性引物,上游引物序列为5′-TTAAATGATAATGACATAGTG-3′,下游引物序列为5′-CCTGGCAAGGCAAGA-3′。结果显示该引物有较强的特异性,6株样品野毒株均可扩增出长894 bp的片段... 

【文章来源】：畜牧兽医学报. 2020,51(10)北大核心CSCD

【文章页数】：10 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 主要毒株及样品
        1.1.2 主要试剂与仪器
    1.2 方法
        1.2.1 病毒RNA提取与反转录
        1.2.2 PCR扩增与测序
        1.2.3 AS-PCR引物设计
        1.2.4 灵敏性与特异性试验
        1.2.5 临床样品检测
2 结 果
    2.1 基因碱基水平的同源性分析比较
    2.2 野毒株和疫苗株的分型结果
    2.3 H基因分析
    2.4 AS-PCR引物及优化
    2.5 AS-PCR引物灵敏度和特异性检测
    2.6 临床样本检测
3 讨 论
4 结 论


【参考文献】：
期刊论文
[1]采用ASPCR技术检测抗药性雨久花ALS突变基因碱基种类的探讨[J]. 吴明根,金万赫,许勇男.  安徽农业大学学报. 2011(02)
[2]SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR检测犬瘟热病毒方法的建立及应用[J]. 黄国君,岳华,杨发龙,兰道亮,汤承,卢建远.  中国预防兽医学报. 2008(06)
[3]SYBR Green I荧光RT-PCR检测犬瘟热方法的建立和应用[J]. 邵四海,孔繁德,吴德峰,陈琼,徐淑菲,温海.  生物技术通报. 2008(01)
[4]犬瘟热病毒RT-PCR检测方法的建立[J]. 王金良,沈志强,管宇,肖跃强,赵元楷.  动物医学进展. 2006(12)
[5]等位基因特异PCR技术的研究与应用[J]. 陈吉宝,景蕊莲,员海燕,卫波.  植物遗传资源学报. 2005(04)

博士论文
[1]不同宿主来源犬瘟热病毒遗传分析与生物学特性研究[D]. 李天松.吉林农业大学 2012



本文编号：3166612