流感病毒与宿主细胞相互作用的棕榈酰化蛋白的分析与鉴定

发布时间：2017-04-19 17:14

  本文关键词：流感病毒与宿主细胞相互作用的棕榈酰化蛋白的分析与鉴定，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：禽流感是由A型流感病毒引起的一种禽类感染的综合症,高致病性禽流感(highly pathogenic avian influenza,HPAI)可引起禽类的高死亡率。由于其可以跨物种传播,所以人类也是禽流感病毒的宿主之一。禽流感自发现以来,已经对人类的身体健康和社会经济造成了巨大危害和损失,是近几年对养禽业造成严重危害的病毒性传染病之一,世界动物卫生组织(Office International Des Epizooties,OIE)和我国家畜家禽防疫条例均将HPAI规定为A类烈性传染病。本研究采用非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)培养禽流感病毒(H5N1),利用酰基-生物素置换(ABE)法和蛋白质组学策略,结合生物质谱技术对H5N1感染的宿主非洲绿猴肾细胞的棕榈酰化修饰的蛋白质组进行了鉴定分析。在流感病毒感染的Vero细胞的棕榈酰化蛋白质组的研究结果如下:(1)空白对照样品鉴定出226个候选蛋白,通过筛选得到56个高可信度棕榈酰化修饰的蛋白。(2)病毒感染的Vero细胞样品鉴定出172个候选蛋白,通过筛选得到28个高可信度棕榈酰化修饰的蛋白。由于棕榈酰化修饰主要发生在膜蛋白和膜相关蛋白中,因此,在传统的棕榈酰化蛋白研究中,科学家主要针对膜蛋白的棕榈酰化进行了研究,对于胞浆蛋白中的棕榈酰化蛋白很少研究。因此,本实验在研究了流感病毒宿主细胞蛋白质组的棕榈酰化的基础上,又对流感病毒宿主Vero细胞的胞浆蛋白的棕榈酰化修饰的变化进行了进一步的研究。在对流感病毒感染Vero细胞过程中胞浆蛋白的棕榈酰化修饰变化的研究结果如下:(3)空白对照样品中共鉴定出40个候选蛋白,通过筛选得到5个高可信度棕榈酰化修饰的蛋白。(4)病毒感染的Vero细胞样品中共鉴定了56个候选蛋白,通过筛选得到17个高可信度棕榈酰化修饰的蛋白。
【关键词】：禽流感 棕榈酰化 质谱 酰基-生物素置换法 蛋白质组
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S852.65
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 缩略词11-12
• 引言12-25
• 1 蛋白质组学及其研究技术的简介12-14
• 1.1 蛋白质组学简介12
• 1.2 蛋白质组学分离技术简介12-14
• 2 禽流感病毒与蛋白质棕榈酰化修饰简介14-25
• 2.1 从禽流感到人流感15-16
• 2.2 蛋白质的脂类修饰16-18
• 2.3 流感病毒蛋白质的简介及其棕榈酰化修饰18-22
• 2.4 棕榈酰化蛋白质的分析检测方法22-25
• 第一章 流感病毒感染的VERO细胞的棕榈酰化蛋白质组的研究25-40
• 1 实验材料25-26
• 1.1 仪器与试剂25-26
• 2 实验方法26-28
• 2.1 病毒感染和蛋白样品制备26
• 2.2 利用酰基-生物素置换反应标记和纯化棕榈酰化蛋白26-27
• 2.3 SDS-凝胶电泳(PAGE)分析27
• 2.4 免疫酶联吸附（ELISA）法对生物素标记的蛋白进行定量分析27
• 2.5 利用胰蛋白酶水解蛋白样品27
• 2.6 利用 Zip Tip C18 Pipette Tips 微量层析柱处理样品27-28
• 2.7 液相色谱-质谱联用分析鉴定蛋白28
• 2.8 数据检索28
• 3 实验结果28-38
• 3.1 SDS-凝胶电泳（PAGE）分析28-29
• 3.2 免疫酶联吸附（ELISA）法对生物素标记的蛋白进行定量分析29
• 3.3 对质谱鉴定得到的蛋白质进行蛋白质组学分析29-34
• 3.4 对筛选得到的15个特异性蛋白质进行生物信息学分析34-36
• 3.5 H5N1流感病毒的棕榈酰化蛋白的分析与鉴定36-38
• 4 小结38-40
• 第二章 流感病毒感染VERO细胞过程中胞浆蛋白的棕榈酰化修饰变化的研究40-48
• 1 实验材料40-41
• 1.1 仪器与试剂40-41
• 2 实验方法41-42
• 2.1 病毒感染和蛋白样品制备41
• 2.2 利用酰基-生物素置换反应标记和纯化棕榈酰化蛋白41
• 2.3 利用胰蛋白酶水解蛋白样品41-42
• 2.4 利用ZipTip C18 Pipette Tips微量层析柱处理样品42
• 2.5 液相色谱-质谱联用分析鉴定蛋白42
• 2.6 数据检索42
• 3 实验结果42-47
• 3.1 对质谱鉴定得到的蛋白质进行蛋白质组学分析42-45
• 3.2 对筛选得到的16个特异性蛋白质进行生物信息学分析45-47
• 4 小结47-48
• 结论48-49
• 参考文献49-56
• 附录56-85
• 作者简介及攻读硕士期间所取得的科研成果85-86
• 致谢86

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2 张玉灵;蛋白质棕榈酰化调控拟南芥根毛极性生长的机理研究[D];山东农业大学;2015年

3 高祥;流感病毒与宿主细胞相互作用的棕榈酰化蛋白的分析与鉴定[D];吉林大学;2016年

  本文关键词：流感病毒与宿主细胞相互作用的棕榈酰化蛋白的分析与鉴定，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：316751