基于金黄色葡萄球菌FnBPA和停乳链球菌GapC 1-150 的多表位疫苗免疫原性研究

发布时间：2021-04-29 23:15

　　金黄色葡萄球菌和链球菌是奶牛乳腺炎的重要致病菌,抗生素已经无法有效的防治金黄色葡萄球菌和链球菌感染。疫苗免疫接种已经成为防治金黄色葡萄球菌和链球菌感染的有效措施。研究表明,在金黄色葡萄球菌和链球菌感染过程中,细胞免疫应答和体液免疫应答均发挥重要作用。因此,有必要研究能够同时预防金黄色葡萄球菌和链球菌感染,且诱导细胞和体液免疫应答的多表位疫苗。金黄色葡萄球菌FnBPA和链球菌GapC高度保守,具有良好的免疫原性,本实验构建包含FnBPA和GapC_1-150的CD4⁺T细胞表位和B细胞表位的多表位疫苗,并对其免疫原性进行了研究。用FnBPA CD4⁺T细胞表位FT(FnBPA_488-505)和B细胞表位FB1(FnBPA_352-364)、FB2(FnBPA_763-772)构建表位疫苗FTB2、FB1B2和FTB1B2。免疫接种BALB/c小鼠,评价其免疫效力。结果,FTB1B2诱导的细胞因子水平显著高于其他表位疫苗,但低于FnBPA;诱导的IgG水平除低于FB... 

【文章来源】：黑龙江八一农垦大学黑龙江省

【文章页数】：85 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略语表
1 文献综述
    1.1 引言
    1.2 奶牛乳腺炎疫苗的研究进展
        1.2.1 奶牛乳腺炎全菌体疫苗
        1.2.2 奶牛乳腺炎荚膜多糖疫苗
    1.3 金黄色葡萄球菌疫苗的研究进展
        1.3.1 金黄色葡萄球菌的致病机制
        1.3.2 金黄色葡萄球菌亚单位疫苗
        1.3.3 金黄色葡萄球菌FnBPA的研究进展
    1.4 链球菌疫苗的研究进展
        1.4.1 链球菌的致病机制
        1.4.2 链球菌亚单位疫苗的研究进展
        1.4.3 链球菌GapC疫苗的研究进展
    1.5 表位疫苗的研究进展
    1.6 本研究的目的与意义
2 金黄色葡萄球菌FnBPA多表位疫苗免疫原性研究
    2.1 材料
        2.1.1 菌株和质粒
        2.1.2 实验动物
        2.1.3 主要试剂
        2.1.4 试剂盒及其他
        2.1.5 主要仪器设备
    2.2 方法
        2.2.1 多表位疫苗的设计
        2.2.2 重组多表位肽原核表达载体鉴定
        2.2.3 重组多表位肽表达纯化及表位肽合成
        2.2.4 小鼠免疫接种及攻毒
        2.2.5 小鼠脾淋巴细胞分离
        2.2.6 脾淋巴细胞增殖检测
        2.2.7 细胞因子水平检测
        2.2.8 间接ELISA法检测血清IgG
        2.2.9 免疫小鼠器官中细菌定殖检测
        2.2.10 统计分析
    2.3 结果
        2.3.1 重组表位肽质粒鉴定
        2.3.2 重组多表位肽表达及纯化结果
        2.3.3 多表位疫苗诱导的淋巴细胞增殖
        2.3.4 多表位疫苗诱导的特异性细胞因子水平
        2.3.5 多表位疫苗诱导的血清IgG水平
        2.3.6 免疫小鼠器官中的细菌定殖量
    2.4 讨论
3 停乳链球菌GapC_(1-150) 多表位疫苗免疫原性研究
    3.1 材料
        3.1.1 菌株和质粒
        3.1.2 实验动物
        3.1.3 主要试剂
        3.1.4 试剂盒及其他
        3.1.5 主要仪器设备
    3.2 方法
        3.2.1 多表位疫苗的设计
        3.2.2 重组多表位肽原核表达载体鉴定
        3.2.3 重组多表位肽表达纯化及表位肽合成
        3.2.4 小鼠免疫接种及攻毒
        3.2.5 小鼠脾淋巴细胞分离
        3.2.6 脾淋巴细胞增殖检测
        3.2.7 细胞因子水平检测
        3.2.8 间接ELISA法检测血清IgG水平
        3.2.9 免疫小鼠器官中的细菌定殖检测
        3.2.10 统计分析
    3.3 结果
        3.3.1 重组多表位肽质粒鉴定
        3.3.2 重组多表位肽表达及纯化结果
        3.3.3 多表位疫苗诱导的淋巴细胞增殖
        3.3.4 多表位疫苗诱导的特异性细胞因子水平
        3.3.5 多表位疫苗诱导的血清IgG水平
        3.3.6 免疫小鼠器官中的细菌定殖量
    3.4 讨论
4 FnBPA和 GapC_(1-150) 多表位疫苗免疫原性研究
    4.1 材料
        4.1.1 菌株和质粒
        4.1.2 实验动物
        4.1.3 主要试剂
        4.1.4 试剂盒及其他
        4.1.5 主要仪器设备
    4.2 方法
        4.2.1 多表位疫苗的设计
        4.2.2 重组多表位肽原核表达载体鉴定
        4.2.3 重组多表位的表达纯化及多肽的合成
        4.2.4 小鼠免疫接种及攻毒
        4.2.5 小鼠的脾淋巴细胞分离
        4.2.6 脾淋巴细胞增殖检测
        4.2.7 细胞因子水平检测
        4.2.8 间接ELISA法检测血清IgG
        4.2.9 免疫小鼠器官中细菌定殖量检测
        4.2.10 统计分析
    4.3 结果
        4.3.1 重组多表位肽质粒鉴定
        4.3.2 重组多表位肽表达及纯化结果
        4.3.3 多表位疫苗诱导的淋巴细胞增殖
        4.3.4 多表位疫苗诱导的特异性细胞因子水平
        4.3.5 多表位疫苗诱导的血清IgG水平
        4.3.6 免疫小鼠器官中的细菌定殖量
    4.4 讨论
5 全文结论
参考文献
致谢
附录
个人简历


【参考文献】：
期刊论文
[1]奶牛乳房炎疫苗研究进展[J]. 刘龙海,李新圃,杨峰,罗金印,王旭荣,张哲,罗增辉,李宏胜.  动物医学进展. 2016(01)
[2]金黄色葡萄球菌黏附素ClfA,FnBPA-A,FnBPA-BCD联合免疫的免疫生物学特性[J]. 姜慧娇,苏艳,申煜.  微生物学报. 2015(10)
[3]长春地区奶牛乳腺炎主要致病菌分离鉴定及药敏试验[J]. 刘春杰,杨丽华,张春,刘靓,王贵,李景思.  南方农业. 2014(18)
[4]金黄色葡萄球菌凝集因子A的免疫原性[J]. 冯昊,刘乐锋,迟佳琦,王宁,李闰婷,佟春玉,马金柱,朱战波,崔玉东.  生物工程学报. 2009(08)
[5]接头序列及其在融合蛋白构建中的应用[J]. 韩小艳,赵娜,王永祥.  河北医科大学学报. 2007(03)

硕士论文
[1]金葡菌FnbpA蛋白CD4+T细胞表位诱导的Th细胞类型及其作用[D]. 王歆桐.黑龙江八一农垦大学 2017
[2]无乳链球菌、停乳链球菌、乳房链球菌GapC蛋白的表达与免疫原性研究[D]. 车车.黑龙江八一农垦大学 2009



本文编号：3168363