初步探究雄激素对和田羊毛囊及角蛋白的影响

发布时间：2021-05-07 10:16

　　【目的】探究雄激素双氢睾酮（DHT）培养和田羊毛囊的最优生长浓度,并用免疫荧光标记法检测雄激素对毛囊细胞增殖及凋亡的影响以及利用实时荧光定量检测和田羊角蛋白基因在雄激素作用下的表达差异。【方法】利用外科显微解剖技术分离毛囊,分组培养在不同浓度的DHT培养液中。利用显微镜测微尺测量每天生长长度,SACPIC染色观察对比毛囊结构的变化,然后利用EdU免疫荧光染色观察毛囊细胞的增殖情况和利用TUNEL法对比毛囊细胞凋亡情况,最后再从分子生物学水平,利用体外培养的不同天数的和田羊毛囊检测角蛋白关联蛋白Kap基因和角蛋白中间丝蛋白Kif基因表达量的差异,并利用统计学方法进行显著性分析。【结果】通过试验筛选合适的和田羊毛囊培养的雄激素浓度在100nM。EdU细胞增殖检测发现雄激素影响下可促进毛囊真皮乳头部位的细胞增殖。TUNEL细胞凋亡检测发现雄激素可延缓细胞的凋亡时间。qPCR结果显:Kap1.1,Kif1.2,Kap2.12,Kap4.2,Kap7和Kap8表达差异在山区型和田羊中显著性最明显;Kap2.9,Kap6.1及Kap5.5在平原型和田羊中差异较显著,而Kap3.2在山区型和平原型中... 

【文章来源】：塔里木大学新疆维吾尔自治区

【文章页数】：81 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
英文缩略词表
前言
第1章 绪论
    1.1 和田羊皮肤毛囊概述
        1.1.1 和田羊皮肤及毛囊的结构特点
        1.1.2 影响毛囊生长发育的相关细胞
    1.2 影响毛囊生长发育的相关调控因子
        1.2.1 表皮生长因子(EGF)
        1.2.2 血管内皮细胞生长因子(VEGF)
        1.2.3 干细胞生长因子(SCF)
        1.2.4 性激素
        1.2.5 其他
    1.3 毛囊生长发育相关的信号通路
        1.3.1 经典的Wnt/β-catenin信号通路
        1.3.2 Notch信号通路
        1.3.3 BMP信号通路
    1.4 microRNA对毛囊发育的调控
    1.5 调控毛囊生长发育的相关基因
        1.5.1 Hox基因(同源框基因)
        1.5.2 Kap基因
    1.6 试验相关技术
        1.6.1 免疫荧光技术
        1.6.2 实时荧光定量PCR技术
    1.7 研究目的意义
第2章 雄激素对体外和田羊毛囊培养的生长影响
    2.1 材料与方法
        2.1.1 新疆和田羊
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 主要试验仪器
    2.2 试验方法
        2.2.1 配制主要试剂
        2.2.2 体外培养和田羊毛囊在雄激素下的生长长度分析
        2.2.3 和田羊毛囊石蜡切片的制作
    2.3 结果分析
        2.3.1 毛囊长度统计结果分析
        2.3.2 SACPIC染色结构分析
    2.4 讨论
    2.5 小结
第3章 雄激素作用下和田羊毛囊细胞增殖和凋亡活跃区分析
    3.1 材料和方法
        3.1.1 试验材料
        3.1.2 主要试剂
        3.1.3 主要仪器
        3.1.4 溶液配制
        3.1.5 试验方法
    3.2 结果与分析
        3.2.1 雄激素作用下对和田羊毛囊细胞增殖的影响
        3.2.2 在雄激素影响下的和田羊毛囊细胞凋亡趋势
        3.2.3 Kap7多克隆抗体在和田羊毛囊细胞中的表达
    3.3 讨论
    3.4 小结
第4章 和田羊皮肤角蛋白的表达量与雄激素作用的相关性分析
    4.1 材料与方法
        4.1.1 试验材料
        4.1.2 主要试剂
        4.1.3 主要仪器
        4.1.4 主要试剂的配制
        4.1.5 引物设计
        4.1.6 试验方法
    4.2 结果与讨论
        4.2.1 获得新疆和田羊毛囊总RNA
        4.2.2 内参基因18SPCR扩增结果
        4.2.3 和田羊毛囊Kaps、Kifs基因扩增结果
        4.2.4 和田羊毛囊实时荧光定量分析
    4.3 讨论
    4.4 小结
第5章 结论
参考文献
致谢
作者简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]山区型和田羊毛囊HGT蛋白KAP6.1、KAP7与KAP8的基因克隆分析[J]. 李志刚,尹阔,李树伟.  畜牧与兽医. 2016(12)
[2]皮肤创伤愈合过程中短暂扩增细胞增生及皮肤干细胞迁移[J]. 王海涛,朱梓赫,李树伟,郭景旭,王洪阳.  中国组织化学与细胞化学杂志. 2016(04)
[3]Wnt/β-catenin信号通路与毛囊的生长[J]. 兰雪梅,杨希川.  实用皮肤病学杂志. 2015(03)
[4]对凋亡细胞TUNEL染色操作中的体会[J]. 张翠香,刘建勋,董小霞,洪晓华,王杨慧,侯金才,付建华,张伟.  实验动物科学. 2014(04)
[5]p38 MAPK信号通路在BMP-2诱导人牙囊细胞成骨分化中的作用[J]. 陈学鹏,施洁珺,叶青松,蔡霞,张天厚.  中国细胞生物学学报. 2013(06)
[6]和田羊毛囊KAP1.1基因的克隆及生物信息学分析[J]. 刘鑫,李树伟,姜仁军.  黑龙江畜牧兽医. 2013(09)
[7]辽宁绒山羊皮肤毛囊VEGF基因表达的RT-PCR检测[J]. 姚纪元,李玉梅,徐海录,杨金生,姜怀志.  中国兽医学报. 2013(03)
[8]山羊β雌激素受体多克隆抗体的制备及免疫组化方法的建立[J]. 刘海港,李宏梅,王树迎,成子强,刘法孝,窦文文,井维芳,郭慧君.  畜牧兽医学报. 2013(02)
[9]哺乳动物毛囊结构特征及调控机制[J]. 马馨,陈洋,姜怀志.  中国草食动物科学. 2013(01)
[10]毛囊发育与毛发生产研究进展[J]. 王宁,荣恩光,闫晓红.  东北农业大学学报. 2012(09)

硕士论文
[1]辽宁新品系绒山羊角蛋白家族基因的表达研究[D]. 王艳杰.辽宁师范大学 2013
[2]Wnt信号通路介导毛囊干细胞双向分化的分子调控机制的初步研究[D]. 邓立欢.广州医学院 2011



本文编号：3173222