肉鸡成肌细胞的分离培养与鉴定

发布时间：2021-05-07 09:20

　　为建立肉鸡成肌细胞的体外分离、培养及鉴定体系,选取11d鸡胚为材料,利用Ⅰ型胶原酶消化鸡胚胸肌,差速贴壁法分离纯化成肌细胞,优化成肌细胞培养条件;通过细胞形态学观察和成肌分化标志基因表达情况进行细胞鉴定,并利用含2%马血清的培养基诱导其成肌分化。结果表明:分离获得的细胞贴壁后呈纺锤形,39.5℃培养条件下细胞增殖速度显著高于37.0℃（P<0.05）;经实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测分析,增殖期与分化期均有成肌细胞的特异性标志基因成肌因子5（Myogenic factor 5,Myf5）与成肌分化因子1（Myogenic differentiation 1,MyoD）的表达,且与增殖期相比,成肌细胞分化期肌细胞生成素（Myogenin,MyoG）与肌肉调节因子4（Muscle regulatory factor,MRF4）基因表达量显著升高（P<0.05）;此外,细胞增殖期结蛋白（Desmin）和分化期肌球蛋白重链（Myosin heavy chain,MyHC）呈阳性表达。综上,成功分离获得了肉鸡成肌细胞,并在39.5℃培养条件下具有更好的增殖能力,为研究肌肉发... 

【文章来源】：中国农业大学学报. 2020,25(09)北大核心CSCD

【文章页数】：8 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 试验材料
    1.2 试验方法
        1.2.1 主要培养基配制
        1.2.2 成肌细胞的分离
        1.2.3 成肌细胞的纯化培养
        1.2.4 成肌细胞适宜培养温度的确定
        1.2.5 成肌细胞的成肌诱导分化
        1.2.6 成肌细胞增殖及分化阶段特异性表达基因鉴定
        1.2.7 成肌细胞Desmin与成肌诱导分化后MyHC免疫荧光鉴定
    1.3 数据统计与分析
2 结果与分析
    2.1 成肌细胞的分离纯化及形态特征
    2.2 成肌细胞在不同温度培养条件下的增殖曲线
    2.3 成肌细胞增殖及分化阶段特异性表达基因的相对表达量分析
    2.4 成肌细胞标志蛋白Desmin的表达检测
    2.5 成肌细胞的诱导分化后标志蛋白MyHC的表达检测
3 讨论
    3.1 成肌细胞的分离方法
    3.2 成肌细胞的纯化方法
    3.3 成肌细胞的增殖培养条件和成肌分化培养条件
    3.4 成肌细胞及其诱导分化
4 结论


【参考文献】：
期刊论文
[1]奶山羊成肌细胞体外分离培养及鉴定[J]. 吕明,罗军,石恒波,田慧彬,王平.  农业生物技术学报. 2018(11)
[2]成肌细胞原代培养及临床应用前景[J]. 邱裕佳,王伟.  生物骨科材料与临床研究. 2017(02)
[3]绵羊成肌细胞的纯化、培养、鉴定及其成肌诱导分化研究[J]. 王红娜,张英杰,刘月琴.  河北农业大学学报. 2016(01)
[4]猪骨骼肌MyHC-Ⅱb基因上调表达的分子机制[J]. 张琪,杜胭脂,王鹏飞,李艳平,王力圆,李毅,孙亿,姜运良.  中国科学:生命科学. 2015(01)
[5]乳兔成骨细胞原代培养与鉴定:改良胶原酶与胰酶的分段消化[J]. 杨森,冯付明,王银辉.  中国组织工程研究. 2014(38)
[6]育雏期肉鸡的发育特点[J]. 刘莉娟.  畜牧兽医杂志. 2014(05)
[7]水溶性苜蓿多糖对肉仔鸡T、B淋巴细胞体外增殖的影响[J]. 刘晴雪,董晓芳,佟建明,徐春燕,王俊丽,张琪.  畜牧兽医学报. 2010(09)
[8]成肌细胞及其在骨骼肌研究中的应用[J]. 潘红英,徐晓阳.  中国组织工程研究与临床康复. 2007(10)

博士论文
[1]猪骨骼肌来源成肌和成脂细胞分化差异的分子机制[D]. 孙文娟.中国农业大学 2017



本文编号：3173148