外源性绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白激活Akt/mTOR和MAPK信号通路并调控自噬的分析

发布时间：2021-05-07 14:55

　　绵羊肺腺瘤病毒（Jaagsiekte sheep retrovirus,JSRV）为β逆转录病毒,属于Retroviridae家族和Othoretrovirinae亚家族。JSRV是绵羊肺腺瘤病（OPA）的病原,OPA是一种传染性的绵羊肺癌。JSRV囊膜蛋白（Envelope,Env）主要激活细胞中的PI3K/Akt和MAPK信号通路。研究表明,细胞自噬在很多种类型的癌症中均受到抑制。细胞的自噬活性往往和肿瘤的恶性发展程度相反。但是仍没有关于自噬形成过程与OPA肿瘤的发展过程,以及JSRV Env诱导细胞转化的过程之间关联的研究。自噬在JSRV Env转化的细胞中是怎样受到信号通路调控的,以及激活的信号通路是否调控细胞自噬,均值得我们深入探讨。本研究检测了 Akt/mTOR信号通路和MAPK信号通路在自然感染OPA病肺组织、JSRV Env转化的NIH3T3细胞和绵羊绒毛膜滋养层细胞中的激活情况。接着检测了自噬因子Beclin-1和LC3 Ⅱ/Ⅰ在自然感染OPA肺组织、JSRV Env诱导转化的NIH3T3细胞和绵羊绒毛膜滋养层细胞中的表达水平,并进一步研究了 Beclin-1和LC3... 

【文章来源】：内蒙古农业大学内蒙古自治区

【文章页数】：147 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词表
1 引言
    1.1 绵羊肺腺瘤概述
        1.1.1 绵羊肺腺瘤病的临床症状、病理学特征以及流行病学概括
        1.1.2 绵羊肺腺瘤病的致瘤机制
    1.2 EGFR简介
        1.2.1 EGFR信号通路
        1.2.3 EGFR与JSRV的关系
    1.3 MAPK信号通路简介
        1.3.1 Ras-Raf-ERK信号通路
        1.3.2 p38 MAPK信号通路
        1.3.3 JNK信号通路
        1.3.4 MAPK信号通路与JSRV的关系
    1.4 PI3K/Akt/mTOR信号通路简介
        1.4.1 Akt信号通路
        1.4.2 mTOR信号通路
        1.4.3 Akt/mTOR信号通路与JSRV的关系
    1.5 细胞自噬简介
        1.5.1 PI3K/Akt/mTOR信号通路调控自噬
        1.5.2 MAPK信号通路调控自噬
        1.5.3 自噬与JSRV的关系
    1.6 研究目的及意义
    1.7 技术路线
2 试验一 自然感染OPA病肺的组织病理学观察与免疫组织化学检测
    2.1 材料与方法
        2.1.1 试验材料
        2.1.2 仪器设备
        2.1.3 试验试剂
        2.1.4 试验方法
    2.2 试验结果
        2.2.1 OPA病肺的组织病理学观察结果
        2.2.2 OPA病肺组织中JSRV Env的表达定位结果
    2.3 讨论
    2.4 小结
3 试验二 EGFR在自然感染OPA病肺组织中表达的检测
    3.1 材料与方法
        3.1.1 试验材料
        3.1.2 仪器设备
        3.1.3 试验试剂
        3.1.4 试验方法
    3.2 试验结果
        3.2.1 OPA病肺组织中EGFR的表达定位结果
        3.2.2 OPA病肺组织中EGFR的蛋白表达检测结果
        3.2.3 讨论
        3.2.4 小结
4 试验三 MAPK和Akt/mTOR通路在自然感染OPA病肺组织中表达的检测
    4.1 材料与方法
        4.1.1 试验材料
        4.1.2 仪器设备
        4.1.3 试验试剂
        4.1.4 试验方法
    4.2 试验结果
        4.2.1 OPA病肺组织中MAPK通路的表达定位结果
        4.2.2 OPA病肺组织中MAPK通路的磷酸化水平检测结果
        4.2.3 OPA病肺组织中Akt/mTOR通路的表达定位结果
        4.2.4 OPA病肺组织中Akt/mTOR通路的磷酸化水平检测结果
        4.2.5 讨论
        4.2.6 小结
5 试验四 Beclin-1和LC31Ⅱ/Ⅰ在自然感染OPA病肺组织中表达的检测
    5.1 材料与方法
        5.1.1 试验材料
        5.1.2 仪器设备
        5.1.3 试验试剂
        5.1.4 试验方法
    5.2 试验结果
        5.2.1 OPA病肺组织中Beclin-1和LC3基因表达检测结果
        5.2.2 OPA病肺组织中Beclin-1和LC3表达定位结果
        5.2.3 OPA病肺组织中Beclin-1和LC3蛋白表达检测结果
        5.2.4 讨论
        5.2.5 小结
6 试验五 EGFR在JSRV Env诱导转化的细胞系中表达的检测
    6.1 材料与方法
        6.1.1 试验材料
        6.1.2 仪器设备
        6.1.3 试验试剂
        6.1.4 试验方法
    6.2 试验结果
        6.2.1 重组表达质粒最佳转染效率的测定结果
        6.2.2 NIH3T3细胞中env基因表达检测结果
        6.2.3 NIH3T3细胞中Env蛋白表达检测结果
        6.2.4 NIH3T3细胞中EGFR的蛋白表达检测结果
        6.2.5 绒毛膜滋养层细胞中env基因表达检测结果
        6.2.6 绒毛膜滋养层细胞中Env蛋白表达检测结果
        6.2.7 绒毛膜滋养层细胞中EGFR的蛋白表达检测结果
        6.2.8 讨论
        6.2.9 小结
7 试验六 MAPK和Akt/mTOR通路在JSRV Env诱导转化的细胞系中的表达
    7.1 材料与方法
        7.1.1 试验材料
        7.1.2 仪器设备
        7.1.3 试验试剂
        7.1.4 试验方法
    7.2 试验结果
        7.2.1 NIH3T3细胞中MAPK通路的检测结果
        7.2.2 NIH3T3细胞中Akt/mTOR通路的检测结果
        7.2.3 滋养层细胞中MAPK通路的检测结果
        7.2.4 滋养层细胞中Akt/mTOR通路的检测结果
        7.2.5 讨论
        7.2.6 小结
8 试验七 Beclin-1和LC3Ⅱ/Ⅰ在JSRV-Env诱导转化的细胞系中表达的检测
    8.1 材料与方法
        8.1.1 试验材料
        8.1.2 仪器设备
        8.1.3 试验试剂
        8.1.4 试验方法
    8.2 试验结果
        8.2.1 NIH3T3细胞中Beclin-1和LC3Ⅱ/Ⅰ的表达检测结果
        8.2.2 滋养层细胞中Beclin-1和LC3Ⅱ/Ⅰ的表达检测结果
        8.2.3 讨论
        8.2.4 小结
9 试验八 MAPK和Akt/mTOR通路调控Beclin-1和LC3Ⅱ/Ⅰ的表达机制
    9.1 材料与方法
        9.1.1 试验材料
        9.1.2 仪器设备
        9.1.3 试验试剂
        9.1.4 试验方法
    9.2 试验结果
        9.2.1 抑制剂条件摸索结果
        9.2.2 NIH3T3细胞中Beclin-1和LC3的基因表达检测结果
        9.2.3 NIH3T3细胞中Beclin-1和LC3Ⅱ/Ⅰ的蛋白表达检测结果
        9.2.4 绒毛膜滋养层细胞中Beclin-1和LC3Ⅱ/Ⅰ的基因表达检测结果
        9.2.5 绒毛膜滋养层细胞中Beclin-1和LC3Ⅱ/Ⅰ的蛋白表达检测结果
        9.2.6 讨论
        9.2.7 小结
10 结论
致谢
参考文献
作者简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]Ras/Raf/MEK/ERK信号通路参与自噬调控作用的研究进展[J]. 王雪,张评浒.  中国药科大学学报. 2017(01)
[2]PI3K/Akt/mTOR信号通路与自噬及肿瘤的关系[J]. 舒婷,万福生.  中国生物化学与分子生物学报. 2016(11)
[3]细胞自噬与肿瘤发生关系的研究进展[J]. 崔丹蕊,刘波,刘伟.  中国科学:生命科学. 2015(06)
[4]新疆绵羊肺腺瘤病理学诊断与全基因组序列分析[J]. 杨素芳,梁田,赵庆亮,张殿卿,司俊强,张静,杨霞,盛金良.  病毒学报. 2015(03)
[5]绵羊肺腺瘤病毒pEGFP-C1/exJSRV-env构建及引起NIH3T3细胞恶性转化的研究[J]. 张宇飞,刘月,王专家,孙晓林,刘淑英.  病毒学报. 2014(03)
[6]绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白致癌作用的研究进展[J]. 张亚坤,刘淑英.  中国兽医科学. 2012(12)
[7]绵羊肺腺瘤病毒的巢式RT-PCR技术检测[J]. 赵泽赟,刘淑英,罗学东.  中国人兽共患病学报. 2011(06)
[8]MAPK信号通路研究进展[J]. 陈建勇,王聪,王娟,曹礼荣.  中国医药科学. 2011(08)
[9]Real-Time PCR和组织原位杂交法检测enJSRV在绵羊胎儿免疫器官及肺脏中的表达[J]. 吴晓莉,齐景伟,刘淑英,徐萌杰.  畜牧兽医学报. 2010(08)
[10]Molecular regulation of vasculogenic mimicry in tumors and potential tumor-target therapy[J]. Yue-Zu Fan,Wei Sun,Department of Surgery,Tongji Hospital,Tongji University School of Medicine,Shanghai 200065,China.  World Journal of Gastrointestinal Surgery. 2010(04)

博士论文
[1]JSRV囊膜蛋白及其亚基诱导NIH 3T3细胞转化与分子发生机制的研究[D]. 刘畅.内蒙古农业大学 2014
[2]JSRV检测及JSRV转录起始调节基因LTR致瘤机制相关性研究[D]. 罗军荣.内蒙古农业大学 2009

硕士论文
[1]RN181通过p38-MAPK对肝癌细胞HepG2凋亡及自噬的影响[D]. 谢瑶.南华大学 2016



本文编号：3173591