獭兔毛色相关基因的筛选及Creb1基因的克隆和多态性分析

发布时间：2021-05-07 14:57

　　家兔的毛皮尤以獭兔皮柔软、美观、轻便、保暖性好,倍受众多消费者的青睐,是一种非常重要的经济性状。哺乳动物毛色形成主要受多种多样的相关基因调控。本试验通过基因芯片技术比较青紫蓝色獭兔和白色獭兔背部皮肤组织样基因的表达差异,利用实时荧光定量PCR技术验证芯片结果,结合生物信息学分析和国内外学者的研究报道,进一步筛选与毛色形成相关差异候选基因进行后续研究,以期为獭兔毛色遗传机制提供一定的基础。本试验的主要结果如下：1.利用表达谱芯片技术筛选3组全同胞青紫蓝色獭兔和白色獭兔背部皮肤组织中的差异表达基因,发现有89个共有的差异基因在三组中表达趋势一致。通过实时荧光定量PCR技术对Creb1、Wnt2、Gnaq和Gna14这4个基因在组织样中的表达量进行检测,验证基因芯片结果。结果表明芯片的结果相对可靠。结合生物信息学分析和文献报道,找到了Creb1、TH、Wnt2、Gnaq、Dvl1、Mapkl2等可能与毛色形成相关的基因。Creb磷酸化可以活化下游MTTF基因的表达,进而激活TYR基因转录,促进黑色素生成。因此,我们选择Crebl基因作进一步研究。2.克隆了獭兔Creb1基因编码序列,并将其与... 

【文章来源】：扬州大学江苏省

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
Abstract
符号说明
第一章 文献综述
    1 獭兔的品种简介
        1.1 獭兔的体型外貌
        1.2 獭兔的繁殖性能
        1.3 獭兔的产肉性能
        1.4 獭兔的毛皮性能
        1.5 獭兔品种的色型特征
    2 基因芯片技术简介
        2.1 基因芯片的概念及原理
        2.2 基因芯片的分类及特点
        2.3 基因芯片技术的应用
    3 与哺乳动物毛色形成相关的部分信号通路和基因
        3.1 环腺苷酸-蛋白激酶A(cAMP-PKA)信号通路
        3.2 Wnt/β-catenin信号通路
        3.3 黑素皮质素受体1基因(MClR)
        3.4 cAMP反应元件结合蛋白1(Creb1)
        3.5 小眼畸形相关转录因子(MITF)
        3.6 酷氨酸酶（TYR)及酪氨酸酶相关蛋白（TYRP1、TYRP2)
    4 本研究的目的和意义
第二章 基因芯片筛选獭兔毛色形成相关基因的初步探究
    1 材料与方法
        1.1 样本采集
        1.2 基因芯片
        1.3 仪器与试剂
        1.4 RNA提取和纯化
        1.5 芯片实验
        1.6 引物设计及合成
        1.7 cDNA制备
        1.8 荧光定量PCR验证
    2 结果
        2.1 差异表达基因
        2.2 GO分类结果
        2.3 与毛色相关差异基因所在的信号通路
        2.4 qRT-PCR验证差异基因
    3 讨论
第三章 獭兔Creb1基因的CDs克隆、生物信息学分析及真核载体构建
    1 材料与方法
        1.1 试验动物
        1.2 试剂与仪器
        1.3 试验方法
    2 结果与分析
        2.1 獭兔Creb1基因编码区的扩增
        2.2 克隆质粒的酶切鉴定
        2.3 重组表达质粒的鉴定结果
        2.4 序列分析及同源性比较结果
        2.5 獭兔与其它物种的系统进化分析
        2.6 Creb1蛋白二级和三级结构预测
    3 讨论
第四章 Creb1基因编码序列多态性检测
    1 材料与方法
        1.1 试验动物
        1.2 主要仪器
        1.3 主要试剂及其配制
        1.4 DNA提取
        1.5 DNA浓度和纯度检测
        1.6 引物设计
        1.7 PCR扩增
        1.8 PCR产物检测
        1.9 PCR-SSCP检测
    2 结果与分析
        2.1 Creb1基因各外显子的琼脂糖凝胶电泳(AGE)结果
        2.2 Creb1基因各外显子的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(N-PAGE)结果
    3 讨论
第五章 全文结论
参考文献
致谢
攻读学位期间发表和参与发表的学术论文目录


【参考文献】：
期刊论文
[1]基于表达谱芯片挖掘抗猪瘟病毒相关基因及其在不同猪瘟抗体水平下的表达差异[J]. 王晓铄,俞英,刘会杰,肖丽,翟立维,敖红,王楚端.  畜牧兽医学报. 2014(01)
[2]水稻与稻瘟病菌不同小种互作的基因差异表达谱分析[J]. 姜兆远,任金平,刘晓梅,邹晓威,郭晓莉,王继春,温嘉伟,刘文平,夏海丰,洪德志.  中国农业科学. 2013(24)
[3]论耳聋基因突变位点检测筛查的方法分析[J]. 郭伊荃.  中外医疗. 2013(28)
[4]基因芯片分析鱼藤素对斑马鱼胚胎发育的影响[J]. 李文浩,刘瑞瑾,吴新荣.  中国组织工程研究. 2013(37)
[5]基因芯片法检测CYP2C19基因多态性研究[J]. 邓杨林,吴晖,钱斌,杨龙,李雪松.  中国医院药学杂志. 2013(20)
[6]液相基因芯片法同时检测3种食源性病原菌[J]. 郭启新,张蕾,张柏棋,赵浩军,韩勤,毛永杨,彭飞进,李苏龙.  食品科学. 2013(16)
[7]邻苯二甲酸二异丁酯对小鼠海马cAMP/PKA-CREB信号转导通路的影响[J]. 马宁,王小丹,高芃,徐海滨.  卫生研究. 2013(03)
[8]基因芯片技术与涂片培养技术对诊断儿童结核病的比较研究[J]. 邓建军,肖国光,万朝敏,曾崇亮,曹玲,舒敏,母得志,周伟.  四川大学学报(医学版). 2013(03)
[9]基因芯片技术筛选哮喘大鼠差异表达基因的研究[J]. 刘鑫,熊花,刘斌,王小莉,罗晓青,黄艳.  中国现代医学杂志. 2013(10)
[10]应用基因芯片研究汉黄芩素对肝癌细胞的生长抑制作用机制[J]. 李美德,黎金浓,曹治云,陈旭征,杜建,黄宝康,廖联明.  肿瘤学杂志. 2013(03)

博士论文
[1]不同被毛密度獭兔皮肤组织的差异表达基因筛选和CCNA2基因的多态性检测及其与被毛密度的相关性研究[D]. 陈赛娟.河北农业大学 2011
[2]几种中药有效成分促黑色素生成的机制研究[D]. 姜泽群.华中科技大学 2009
[3]丹皮酚抑制黑素合成相关分子机制的研究及KC-MC共培养体系中细胞因子对黑素合成的反馈调节[D]. 卜今.中国协和医科大学 2008

硕士论文
[1]利用表达谱芯片技术筛选家兔肌肉发育相关基因[D]. 李挺.扬州大学 2013
[2]家兔MITF基因同源性、多态性分析及不同时期表达水平研究[D]. 何孟颉.扬州大学 2012
[3]采用基因芯片筛选棉花产量性状相关基因[D]. 张利媛.华中农业大学 2011
[4]猪SREBPs和CREB-1基因的克隆、染色体定位及其功能研究[D]. 聂涛.华中农业大学 2005



本文编号：3173594