氨基糖苷类抗生素特异性单链DNA适配体的筛选及其应用研究
发布时间：2021-05-07 19:51
庆大霉素和妥布霉素都属于氨基糖苷类抗生素,对革兰氏阴性菌有较强的抑菌效用,但是不规范的使用会使得其残留在动物源性食品中,并且通过食物链在人体内富集。以适配体作为识别元件的氨基糖苷类抗生素残留的检测在食品和环境安全等诸多领域具有重要意义。本论文包含了适配体的筛选和应用两部分内容:首先通过九轮筛选获得庆大霉素特异性的单链DNA（ssDNA）适配体,并对适配体的结构和特性进行表征;其次将已有报道的妥布霉素适配体和本论文筛选所得的庆大霉素适配体应用于抗生素残留的检测。首先将指数富集的配体系统进化技术（SELEX）与亲和层析法联用,从长度为79个nt（中间包括35个随机核苷酸）的初始文库出发,经过九轮的筛选,庆大霉素与文库序列间的亲和力达到最高。将最后一轮的筛选产物进行PCR扩增,再挑取阳性克隆子进行测序,得到34条不同的庆大霉素适配体序列。利用DNAMAN对这些适配体序列进行同源性分析,将其分为六大家族。利用Mfold软件在线分析这些序列的二级结构及结构稳定性,将每一家族中结构最稳定的适配体进行解离常数（Kd）的测定。利用荧光法测得5,8,22和26号适配体的解离常数分别...
【文章来源】：江南大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：51 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 绪论
1.1 抗生素及其残留概述
1.1.1 抗生素的分类
1.1.2 抗生素残留来源与分布
1.1.3 氨基糖苷类抗生素及其残留概述
1.2 抗生素残留的检测
1.3 核酸适配体
1.3.1 核酸适配体简介
1.3.2 核酸适配体的特点
1.3.3 核酸适配体的筛选
1.3.4 核酸适配体的应用
1.4 纳米技术在生物检测中的应用
1.5 立题意义
1.6 主要研究内容
第二章 材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 实验中所需要用到的引物和寡核苷酸序列
2.1.2 主要仪器
2.1.3 主要试剂
2.1.4 主要缓冲液的配制
2.2 庆大霉素核酸适配体的筛选
2.2.1 PCR扩增体系及条件
2.2.2 亲和层析柱的制备
2.2.3 庆大霉素核酸适配体的筛选过程
2.2.4 筛选产物的克隆、测序和序列分析
2.2.5 适配体序列解离常数(Kd)的测定
2.2.6 庆大霉素核酸适配体的特异性实验
2.2.7 庆大霉素与核酸适配体的分子对接模拟
2.3 AuNPs比色法检测氨基糖苷类抗生素的研究
2.3.1 AuNPs比色法检测妥布霉素
2.3.2 AuNPs比色法检测庆大霉素
第三章 结果与讨论
3.1 庆大霉素核酸适配体的筛选
3.1.1 PCR退火温度的优化
3.1.2 庆大霉素核酸适配体的筛选过程
3.1.3 庆大霉素核酸适配体筛选轮数的确定
3.1.4 对筛选到的适配体序列的分析
3.1.5 适配体序列解离常数的测定
3.1.6 庆大霉核酸适配体的结合特异性验证
3.1.7 庆大霉素核酸适配体的结构分析
3.1.8 小结
3.2 AuNPs比色法检测氨基糖苷类抗生素的研究
3.2.1 基于适配体的AuNPs比色法检测抗生素的原理
3.2.2 AuNPs比色法检测妥布霉素的研究
3.2.3 AuNPs比色法检测庆大霉素的研究
3.2.4 小结
主要结论与展望
致谢
参考文献
附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文
【参考文献】：
期刊论文
[1]DNA aptamer selected for specific recognition of prostate cancer cells and clinical tissues[J]. Zhi-Xiang Huang,Qin Xie,Qiu-Ping Guo,Ke-Min Wang,Xiang-Xian Meng,Bao-Yin Yuan,Jun Wan,Yuan-Yuan Chen. Chinese Chemical Letters. 2017(06)
[2]基于配子的抗生素检测研究进展[J]. 蔡义林,袁爱梦,蔡珺珂,李彤,李颖,齐斌,朱颖越. 食品工业科技. 2016(16)
[3]金纳米粒子和聚合物复合体系分子设计与组装过程的计算机模拟[J]. 李延春,李洋. 化学进展. 2015(07)
[4]HPLC法测定原料乳中庆大霉素残留的研究[J]. 赵静,刘婷,蔡柏岩,刘鹏,钱镭. 食品研究与开发. 2015(09)
[5]牛奶中庆大霉素半定量胶体金试纸条的研制[J]. 王丽哲,王丽丽,赵瑜,于重楠,唐慧林,刘敏,何艳玲. 中国饲料. 2013(20)
[6]微生物法检测乳粉中抗生素残留的构建[J]. 王超逸,马凯,王勇军. 浙江农业科学. 2013(03)
[7]适配体电化学生物传感器研究进展[J]. 黄海平,朱俊杰. 分析科学学报. 2011(03)
[8]牛乳中抗生素检测方法的研究[J]. 杨旭,王力群. 畜牧兽医科技信息. 2008(11)
[9]牛奶中抗生素残留及其检测技术的研究进展[J]. 李友杰,许杨,郭杰标. 食品工业科技. 2008(08)
[10]微生物法测定兔血清中低浓度的庆大霉素[J]. 尹情胜,任翠丽,陈殿良,王世亮. 药物分析杂志. 2006(12)
硕士论文
[1]纳米模拟酶活性研究及其在抗生素检测中的应用[D]. 王春帅.江南大学 2017
[2]妥布霉素特异性单链DNA适配体的筛选及其序列优化和应用研究[D]. 张玉红.江南大学 2017
[3]基于碳纳米管的庆大霉素免疫分析方法研究[D]. 韦薇.江苏大学 2016
[4]基于石墨烯的抗生素特异性适配体筛选和传感器构建[D]. 游元丁.江南大学 2015
[5]链霉素特异性单链DNA适配体的筛选及其在检测中的应用[D]. 王靖元.江南大学 2013
本文编号：3173966
【文章来源】：江南大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：51 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 绪论
1.1 抗生素及其残留概述
1.1.1 抗生素的分类
1.1.2 抗生素残留来源与分布
1.1.3 氨基糖苷类抗生素及其残留概述
1.2 抗生素残留的检测
1.3 核酸适配体
1.3.1 核酸适配体简介
1.3.2 核酸适配体的特点
1.3.3 核酸适配体的筛选
1.3.4 核酸适配体的应用
1.4 纳米技术在生物检测中的应用
1.5 立题意义
1.6 主要研究内容
第二章 材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 实验中所需要用到的引物和寡核苷酸序列
2.1.2 主要仪器
2.1.3 主要试剂
2.1.4 主要缓冲液的配制
2.2 庆大霉素核酸适配体的筛选
2.2.1 PCR扩增体系及条件
2.2.2 亲和层析柱的制备
2.2.3 庆大霉素核酸适配体的筛选过程
2.2.4 筛选产物的克隆、测序和序列分析
2.2.5 适配体序列解离常数(Kd)的测定
2.2.6 庆大霉素核酸适配体的特异性实验
2.2.7 庆大霉素与核酸适配体的分子对接模拟
2.3 AuNPs比色法检测氨基糖苷类抗生素的研究
2.3.1 AuNPs比色法检测妥布霉素
2.3.2 AuNPs比色法检测庆大霉素
第三章 结果与讨论
3.1 庆大霉素核酸适配体的筛选
3.1.1 PCR退火温度的优化
3.1.2 庆大霉素核酸适配体的筛选过程
3.1.3 庆大霉素核酸适配体筛选轮数的确定
3.1.4 对筛选到的适配体序列的分析
3.1.5 适配体序列解离常数的测定
3.1.6 庆大霉核酸适配体的结合特异性验证
3.1.7 庆大霉素核酸适配体的结构分析
3.1.8 小结
3.2 AuNPs比色法检测氨基糖苷类抗生素的研究
3.2.1 基于适配体的AuNPs比色法检测抗生素的原理
3.2.2 AuNPs比色法检测妥布霉素的研究
3.2.3 AuNPs比色法检测庆大霉素的研究
3.2.4 小结
主要结论与展望
致谢
参考文献
附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文
【参考文献】：
期刊论文
[1]DNA aptamer selected for specific recognition of prostate cancer cells and clinical tissues[J]. Zhi-Xiang Huang,Qin Xie,Qiu-Ping Guo,Ke-Min Wang,Xiang-Xian Meng,Bao-Yin Yuan,Jun Wan,Yuan-Yuan Chen. Chinese Chemical Letters. 2017(06)
[2]基于配子的抗生素检测研究进展[J]. 蔡义林,袁爱梦,蔡珺珂,李彤,李颖,齐斌,朱颖越. 食品工业科技. 2016(16)
[3]金纳米粒子和聚合物复合体系分子设计与组装过程的计算机模拟[J]. 李延春,李洋. 化学进展. 2015(07)
[4]HPLC法测定原料乳中庆大霉素残留的研究[J]. 赵静,刘婷,蔡柏岩,刘鹏,钱镭. 食品研究与开发. 2015(09)
[5]牛奶中庆大霉素半定量胶体金试纸条的研制[J]. 王丽哲,王丽丽,赵瑜,于重楠,唐慧林,刘敏,何艳玲. 中国饲料. 2013(20)
[6]微生物法检测乳粉中抗生素残留的构建[J]. 王超逸,马凯,王勇军. 浙江农业科学. 2013(03)
[7]适配体电化学生物传感器研究进展[J]. 黄海平,朱俊杰. 分析科学学报. 2011(03)
[8]牛乳中抗生素检测方法的研究[J]. 杨旭,王力群. 畜牧兽医科技信息. 2008(11)
[9]牛奶中抗生素残留及其检测技术的研究进展[J]. 李友杰,许杨,郭杰标. 食品工业科技. 2008(08)
[10]微生物法测定兔血清中低浓度的庆大霉素[J]. 尹情胜,任翠丽,陈殿良,王世亮. 药物分析杂志. 2006(12)
硕士论文
[1]纳米模拟酶活性研究及其在抗生素检测中的应用[D]. 王春帅.江南大学 2017
[2]妥布霉素特异性单链DNA适配体的筛选及其序列优化和应用研究[D]. 张玉红.江南大学 2017
[3]基于碳纳米管的庆大霉素免疫分析方法研究[D]. 韦薇.江苏大学 2016
[4]基于石墨烯的抗生素特异性适配体筛选和传感器构建[D]. 游元丁.江南大学 2015
[5]链霉素特异性单链DNA适配体的筛选及其在检测中的应用[D]. 王靖元.江南大学 2013
本文编号：3173966
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