绵羊痒螨巨噬细胞迁移抑制因子重组蛋白对兔外周血单个核细胞Th1/Th2型和Th17/Treg型特征因子表达的影响

发布时间：2021-05-08 02:12

　　为了初步探讨绵羊痒螨巨噬细胞迁移抑制因子（PoMIF）对健康新西兰兔外周血单个核细胞（PBMC）中Th1/Th2和Th17/Treg细胞平衡的变化。采用RT-PCR从绵羊痒螨总RNA中扩增得到MIF全长基因,经原核表达、纯化重组PoMIF（rPoMIF）蛋白,并分析其氧化还原酶和互变异构酶活性。筛选与健康新西兰兔PBMC孵育的最佳rPoMIF浓度,且用最佳浓度rPoMIF(0.2μg·mL^-1)与PBMC共同孵育0、1、6、12、24、36 h后收集细胞,用荧光定量PCR检测其Th1/Th2/Th17/Treg细胞相对应的特征性转录因子T-bet/GATA-3/RORc/Foxp3和特征性细胞因子IFN-γ/IL-4/IL-17A/IL-10 mRNA表达变化。结果表明:PoMIF全长363 bp,rPoMIF大小为32 ku（含pET32a标签蛋白19 ku）,且具有互变异构酶活性;rPoMIF刺激后PBMC中Th1细胞的T-bet和IFN-γ先下降后上升,Th2细胞的GATA-3和IL-4均呈下降趋势,且T-bet/GATA-3和IFN-γ/IL-4比值在12... 

【文章来源】：畜牧兽医学报. 2020,51(03)北大核心CSCD

【文章页数】：8 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 主要仪器和试剂
    1.2 实验动物
    1.3 螨虫收集、总RNA的提取和cDNA反转录
    1.4 PoMIF基因的克隆、表达与纯化
    1.5 PoMIF内毒素去除及酶活测定
    1.6 兔PBMC的分离、培养和分组处理
    1.7 PBMC的实时荧光定量PCR检测
    1.8 统计学分析
2 结 果
    2.1 PoMIF的扩增、原核表达和纯化
    2.2 rPoMIF内毒素去除及酶活测定
    2.3 实时荧光定量PCR检测兔PBMC中免疫相关因子的mRNA水平
        2.3.1 最佳rPoMIF浓度的筛选
        2.3.2 兔PBMC中转录因子与细胞因子变化
3 讨 论
    3.1 MIF的催化活性
    3.2 MIF的细胞因子功能和其浓度有关
    3.3 rPoMIF对兔PBMC Th1/Th2和Th17/Treg细胞平衡的影响
4 结 论



本文编号：3174470