毛色相关miRNAs及其靶基因在不同品种、不同月龄山羊皮肤中的表达研究

发布时间：2021-05-08 16:14

　　毛色是山羊重要的经济性状,同时也是识别动物品种的重要标志,对山羊毛色遗传规律的研究,有利于获得育种目标所确定的或者市场所要求的毛色类型。miRNA是一类内源性、单链小分子RNA,通过与靶基因互补配对,从而导致靶基因mRNA的降解,抑制蛋白质的合成,最终参与机体多种生命活动。但目前这两者之间的研究较少,本试验旨在研究毛色相关miRNA及其靶基因在不同品种、不同月龄山羊皮肤中的表达,为探究miRNA对毛色形成的影响机制奠定基础,为解析毛色相关miRNA在山羊被毛颜色形成中的作用提供参考。首先,本试验选取饲养在西南大学种羊场的大足黑山羊、内蒙古绒山羊以及不同年龄阶段（0月龄、2月龄、6月龄和12月龄）的大足黑山羊内蒙古绒山羊杂交F₁代山羊各6只,手术法采集其皮肤及毛发。测定不同品种、不同月龄山羊皮肤及毛发中黑色素含量以及黑色素在皮肤中的表达部位,同时利用荧光定量PCR测定miRNA及其靶基因在皮肤中的表达情况。之后利用Western20blot及免疫组化研究靶基因在蛋白水平的表达情况及其蛋白在皮肤中的表达部位。主要研究结果如下:1、大足黑山羊皮肤及毛发中黑色素含量均显著... 

【文章来源】：西南大学重庆市 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：74 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
常用中英文缩略词表
第1章 文献综述
    1.1 动物毛色与黑色素
        1.1.1 山羊毛色
        1.1.2 黑色素
    1.2 黑色素合成相关信号通路
        1.2.1 cAMP信号通路
        1.2.2 PKC信号通路
        1.2.3 MAPK信号通路
        1.2.4 NO信号通路
        1.2.5 Wnt信号通路
    1.3 黑色素合成重要基因
        1.3.1 TYR
        1.3.2 MITF
        1.3.3 ASIP
    1.4 miRNA与毛色的关系
        1.4.1 miRNA
        1.4.2 毛色相关miRNAs
第2章 引言
    2.1 研究目的与意义
    2.2 技术路线
第3章 试验材料与方法
    3.1 试验材料
        3.1.1 试验动物
        3.1.2 实验耗材
    3.2 试验试剂与仪器
        3.2.1 主要药品和试剂
        3.2.2 主要仪器设备
        3.2.3 主要试剂及其配制成分
    3.3 试验方法
        3.3.1 试验组织获取
        3.3.2 皮肤黑色素提取
        3.3.3 毛发黑色素提取
        3.3.4 黑色素标准曲线制作
        3.3.5 黑色素染色
        3.3.6 RNA提取(Trizol抽提法)
        3.3.7 c DNA第一条链合成及q RT-PCR
        3.3.8 免疫组化
        3.3.9 总蛋白提取、浓度测定
        3.3.10 Western Blotting
        3.3.11 数据统计分析
第4章 试验结果与分析
    4.1 不同品种、不同月龄山羊皮肤采集及其黑色素含量测定
        4.1.1 山羊皮肤及羊毛采集
        4.1.2 不同品种山羊皮肤及毛发黑色素含量测定
        4.1.3 不同月龄山羊皮肤及毛发黑色素含量
        4.1.4 不同品种山羊皮肤黑色素染色
        4.1.5 不同月龄山羊皮肤黑色素染色
    4.2 毛色相关miRNAs在不同品种、不同月龄山羊皮肤中的表达
        4.2.1 毛色相关miRNAs的筛选
        4.2.2 miRNA和 U6 的扩增曲线和熔解曲线
        4.2.3 毛色相关miRNAs在不同品种山羊皮肤中的表达
        4.2.4 毛色相关miRNAs在不同月龄山羊皮肤中的表达
    4.3 靶基因在不同品种、不同月龄山羊皮肤中的表达
        4.3.1 miRNAs靶基因预测及筛选
        4.3.2 山羊皮肤RNA完整性检测
        4.3.3 靶基因在不同品种山羊皮肤中的表达
        4.3.4 靶基因在不同月龄山羊皮肤中的表达
        4.3.5 TYR、MITF蛋白质水平表达情况
        4.3.6 TYR蛋白在山羊皮肤中的表达部位
第5章 讨论
    5.1 山羊皮肤研磨方法
        5.1.1 皮肤组织结构
        5.1.2 传统组织研磨方式
    5.2 皮肤毛囊
        5.2.1 毛囊生长规律
        5.2.2 山羊毛囊周期
    5.3 miRNAs在山羊皮肤中的表达
        5.3.1 miR-129-5p
        5.3.2 miR-148a
        5.3.3 miR-381-3p
        5.3.4 miR-543-3p和 miR-544-5p
    5.4 靶基因在山羊皮肤中的表达
        5.4.1 TYR
        5.4.2 MITF
        5.4.3 EP300
        5.4.4 GSK3β、FZD
        5.4.5 EDN1、PLCB
    5.5 miRNAs与靶基因之间的相互作用
第6章 结论
参考文献
附录
致谢
发表论文一览表


【参考文献】：
期刊论文
[1]miR-129-5p靶向调节果蝇形态同系物2基因抑制喉鳞癌细胞增殖和诱导凋亡的体外研究[J]. 许雨洲,孙占伟.  中国耳鼻咽喉头颈外科. 2019(12)
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[4]水貂ASIP基因单倍型检测及其皮肤组织mRNA差异表达分析[J]. 宋兴超,刘琳玲,王淑明,宋姗姗,徐超,杨童奥,刘宗岳,丛波,张志明,杨福合,彭英华.  中国畜牧兽医. 2019(10)
[5]色素关键基因在山羊皮肤和B16-F10细胞增殖、分化阶段的表达及相关性研究[J]. 蒋婧,任航行,李杰,王高富,陈灿灿,付琳,张丽,刘良佳,周鹏.  西南农业学报. 2019(09)
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博士论文
[1]陕北白绒山羊毛囊干细胞增殖分化相关miRNA的鉴定及功能研究[D]. 闫海龙.西北农林科技大学 2019
[2]miR-129-5p靶向Wnt5a调控PKC/ERK/NF-κB和JNK信号通路抑制胶质瘤发生发展的机制研究[D]. 李严.南京医科大学 2018
[3]microRNA-5110共靶Wnt1和MLPH调控黑色素细胞内色素沉积的作用机制研究[D]. 杨姗姗.山西农业大学 2018
[4]内蒙古绒山羊胎儿期皮肤毛囊形态发生和发育规律及部分Hox基因家族成员研究[D]. 张燕军.内蒙古农业大学 2007

硕士论文
[1]蒙古马被毛毛囊形态及周期与黑色素合成相关基因的研究[D]. 李超.内蒙古农业大学 2019
[2]猪MC1R、ASIP、TYR、TYRP1和SLC45A2基因多态性及其与毛色相关性研究[D]. 彭刚.华中农业大学 2019
[3]菲律宾蛤仔与壳色相关microRNA的发掘和初步验证[D]. 温嫱.大连海洋大学 2019
[4]miR-100-5p与FGF21对羊驼黑色素细胞色素生成的调控[D]. 王瑞玮.山西农业大学 2018
[5]猪肌内脂肪差异性沉积关键基因鉴定及AQP3的功能研究[D]. 杨晶.西北农林科技大学 2018
[6]大足黑山羊和内蒙古绒山羊杂交F1代遗传特征分析[D]. 张继攀.西南大学 2018
[7]内皮素1（EDN1）对绵羊皮肤黑色素细胞内黑色素生成的影响[D]. 庞亚妙.山西农业大学 2015
[8]山羊胎儿皮肤黑色素生成有关miRNA的筛选与鉴定[D]. 孙武.西南大学 2015
[9]绒山羊毛囊周期性变化与兴盛期毛囊KAP13-1基因的表达[D]. 李长青.内蒙古农业大学 2005



本文编号：3175635