獭兔生长激素基因克隆及原核细胞表达的初步研究

发布时间：2021-05-09 15:37

　　獭兔原产于法国，又名力克斯兔（Rex20rabbit）是一种皮肉兼用兔，由于獭兔皮毛酷似水貂而得名。獭兔体型明显小于肉兔体型，所以獭兔皮张面积将小于肉兔皮张面积。通过改变獭兔生长发育性能期望提高獭兔体型，从而在不改变獭兔皮毛优质的情况下提高獭兔的生长速度与体型大小。由于獭兔与肉兔进行传统遗传育种杂交时会破坏后代的皮毛质量，产生大量针毛，大幅度降低獭兔皮用价值。所以獭兔在生产管理及遗传育种培养时坚决不能与肉兔进行杂交培养。随着现代科学技术的发展，转基因獭兔必将成为生产皮用獭兔的一个必然发展趋势。GH20（Growth20hormone）基因已经在多种动物体上取得了许多研究成果。生长激素（GH）是动物脑垂体前叶嗜酸性细胞所分泌的一种激素，它主要作用是刺激骨、软骨细胞的生长和分化，调节蛋白质、糖以及脂肪的代谢。生长激素（GH）基因是生长激素（GH）的遗传物质基础，是重要的生理机能基因，所以对GH基因的相关研究一直为人们所关注。本研究采用RT-PCR技术克隆得到獭兔GH基因。通过载体pMD18-T转化大肠杆菌DH5α，经过测序证明成功克隆得到獭兔GH基因，长651bp，可编码216个氨基酸（含... 

【文章来源】：内蒙古农业大学内蒙古自治区

【文章页数】：47 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
1 引言
    1.1 獭兔的简介
        1.1.1 獭兔的起源
        1.1.2 獭兔的经济价值
        1.1.3 内蒙古獭兔发展
    1.2 转基因动物研究进展
        1.2.1 转基因动物的研究历史
        1.2.2 转基因动物的研究优势
        1.2.3 转基因克隆的研究方法
        1.2.4 PCR 的原理及过程
        1.2.5 转基因动物的研究意义
        1.2.6 转基因动物的发展前景
    1.3 生长激素 GH 基因及研究情况
        1.3.1 生长激素 GH
        1.3.2 生长激素 GH 基因及其他相关研究
    1.4 基因打靶技术
        1.4.1 tetR和 ampR抗性基因的插入失活检验
        1.4.2 α -互补乳糖操纵子模型筛选
        1.4.3 聚果糖蔗糖转移酶基因筛选
2 獭兔生长激素基因的克隆及鉴定
    2.1 研究背景
    2.2 实验材料
        2.2.1 实验獭兔及组织细胞采样
        2.2.2 引物设计
        2.2.3 质粒及菌株
        2.2.4 主要试剂
    2.3 试验方法及步骤
        2.3.1 引物设计
        2.3.2 提取 RNA
        2.3.3 基因克隆
        2.3.4 PCR 产物检验
    2.4 结果与分析
        2.4.1 生长激素基因扩增结果
        2.4.2 质粒 PCR 检测结果
        2.4.3 阳性克隆测序结果
        2.4.4 獭兔 GH 基因 CDS 与几种动物对比分析
    2.5 讨论
    2.6 小结
3 獭兔 GH 基因原核表达
    3.1 研究背景
    3.2 实验材料
        3.2.1 载体及菌株
        3.2.2 实验试剂
    3.3 方法、步骤
        3.3.1 GH 基因与表达载体连接
        3.3.2 连接产物转化大肠杆菌 BL21（DE3）
        3.3.3 诱导表达
        3.3.4 优化诱导靶蛋白表达
        3.3.5 提纯表达蛋白
        3.3.6 表达产物的 Western-blotting 检测
    3.4 结果
        3.4.1 重组质粒 pET-32a（+）GH 构建
        3.4.2 不同 ITPG 诱导结果
    3.5 讨论
    3.6 小结
4 结论
5 展望
致谢
参考文献
作者简介


【参考文献】：
期刊论文
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[2]中国生物克隆技术之父——童第周[J]. 朱作言,李明,康乐,郝宁.  生物物理学报. 2010(10)
[3]实时荧光定量PCR技术研究进展及其应用[J]. 陈旭,齐凤坤,康立功,李景富.  东北农业大学学报. 2010(08)
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博士论文
[1]不同被毛密度獭兔皮肤组织的差异表达基因筛选和CCNA2基因的多态性检测及其与被毛密度的相关性研究[D]. 陈赛娟.河北农业大学 2011
[2]山羊产羔和牛精液品质与卵泡发育性状主基因鉴定及功能研究[D]. 滑国华.华中农业大学 2009

硕士论文
[1]猪和小鼠生长激素核心启动子的鉴定及调控差异的研究[D]. 阮楠.吉林大学 2012
[2]二花脸猪生长激素基因表达的发育性变化及其与大白猪的比较研究[D]. 徐金先.南京农业大学 2001



本文编号：3177566