应用dsRNA干扰技术对旋毛虫Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂基因功能的初步研究

发布时间：2021-05-10 05:50

　　为研究旋毛虫Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂基因的功能,通过电转法将dsRNA导入旋毛虫体内,应用实时荧光定量PCR和Western-blot检测经dsRNA-TsKaSPI电转法处理后肌幼虫TsKaSPI基因转录和表达水平。体外培养观察TsKaSPI基因沉默对肌幼虫存活的影响。将dsRNA导入后的幼虫经口接种小鼠,观察TsKaSPI基因沉默对幼虫存活、发育及雌虫生殖力的影响。实时荧光定量PCR和Western-blot检测结果显示,旋毛虫肌幼虫经30μg/mL20dsRNA电转处理后TsKaSPI基因的转录和表达分别降低63.36%和69.24%（P<0.05）。TsKaSPI基因在dsRNA-TsKaSPI转入肌幼虫后第1天转录水平明显降低,第2和第3天仍处于较低的水平。PBS组、dseGFP对照组和dsRNA-TsKaSPI处理组的肌幼虫死亡率分别为61%、58%、52%（P>0.05）。将dsRNA电转处理的肌幼虫接种小鼠后620d肠道成虫和3520d肌幼虫的减虫率分别为36.22%和31.87%。PBS组、dseGFP对照组和dsRNA-TsKaSPI处理组的感染小... 

【文章来源】：中国兽医科学. 2020,50(05)北大核心CSCD

【文章页数】：7 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 虫种、菌株及试剂
    1.2 旋毛虫肌幼虫的收集
    1.3 dsRNA的制备
    1.4 dsRNA的电转法导入
    1.5 mRNA表达量的实时荧光定量PCR检测
    1.6 TsKaSPI基因蛋白水平的Western-blot检测
    1.7 TsKaSPI基因沉默对旋毛虫幼虫体外存活的影响
    1.8 TsKaSPI基因沉默对旋毛虫体内发育及雌虫生殖力的影响
    1.9 数据分析
2 结果
    2.1 T7启动子连接目的片段及dsRNA的合成
    2.2 旋毛虫肌幼虫经dsRNA电转处理后TsKaSPI mRNA的转录水平
    2.3 旋毛虫肌幼虫经ds RNA电转处理后蛋白表达水平的变化
    2.4 dsRNA干扰TsKaSPI基因沉默对肌幼虫存活、发育及雌虫生殖力的影响
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
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[6]应用RNA干扰技术对旋毛虫Ts87基因功能的初步研究[J]. 郝冉,杨雅平,杨静,王少华,诸欣平.  寄生虫与医学昆虫学报. 2008(01)
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本文编号：3178808