高致病性蓝耳病（PRRS）抗性基因标记的筛选及其分子标记检测试剂盒的研制
发布时间：2021-05-10 13:53
猪繁殖与呼吸综合征（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome, PRRS）是目前养猪业危害最大、控制最难的传染病之一。疫苗免疫、药物治疗以及营养保健等措施虽然在一定程度上控制了该病的蔓延,但是因为其病原（蓝耳病病毒,PRRSV）存在较强的遗传变异性、且能逃脱宿主免疫机制等特点,难以有效地控制该病的发生。因此,近年来有关抗病育种研究和提高猪自身抗病力也成为蓝耳病防治的一个新发展方向。本研究主要研究内容包括,（1）分析五个基因（MBL2、DUSP1、GBP2、Mx1、 NID2）的不同基因型分别在不同猪群中的频率及其蓝耳病发病相对风险率、不同基因型母猪在蓝耳病爆发期间的产死仔率（含死胎、木乃伊）；（2）以本小组前期筛选获得的与蓝耳病发病相对风险率相关的CD169基因C1654A变异位点为对象,初步研制了一个针对该位点的检测试剂盒。本研究的目的在于：（1）筛选与蓝耳病抗性相关的分子标记；（2）研制出相应的分子标记检测试剂盒,为将来分子辅助选择育种打下基础。本研究的主要研究结果如下：1、建立了MBL2基因外显子6中A295G突变位点的AS-PC...
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略词表(Abbreviation words)
第一章 文献综述
1 前言
2 PRRS流行动态
2.1 国内外流行特点
2.2 PRRSV传播方式
2.3 PRRS的防治措施
3 抗病育种的研究进展
3.1 抗病育种的意义
3.2 抗病机理
3.3 抗病育种的遗传基础
3.4 抗病育种的措施
3.5 抗病候选基因的研究进展
4 基因多态性分析的方法
4.1 SNP
4.2 PCR-RFLP
4.3 AS-PCR
第二章 研究目的与意义
第三章 材料与方法
1 试验材料
1.1 实验猪群及样本采集
1.2 性状记录
2 主要仪器及设备
3 主要试剂及配制
3.1 常用试剂
3.2 主要试剂的配制
3.3 Taq酶、回收试剂盒、测序和限制性内切酶
4 试验方法
4.1 猪基因组中提取DNA
4.2 基因组DNA质量和浓度的检测
4.3 主要分子生物学软件和数据统计分析软件
4.4 PCR引物的稀释
4.5 AS-PCR反应体系及反应程序
4.6 PCR-RFLP分析
4.7 PCR产物的回收测序
5 分子标记的统计分析方法
5.1 等位基因频率和基因型频率
5.2 各基因型发病风险度分析
6 五个候选基因SNP筛选及其检测
6.1 猪MBL2基因SNP位点检测
6.2 猪DUSP1基因SNP位点检测
6.3 猪GBP2基因SNP位点检测
6.4 猪Mx1基因SNP位点检测
6.5 猪NID2基因SNP位点检测
7 蓝耳病抗性分子标记(SNP)检测试剂盒的研制
7.1 试剂组分的探讨
7.2 试剂保质期的探讨
7.3 试剂盒特异性的分析
7.4 试剂盒灵敏度的分析
7.5 试剂盒的外包装和内容
7.6 试剂盒的操作使用说明
第四章 结果与分析
1 猪五个候选基因SNP及其蓝耳病抗性遗传效应的分析
1.1 猪MBL2基因SNP及其蓝耳病抗性遗传效应的分析
1.2 猪DUSP1基因SNP及其蓝耳病抗性遗传效应的分析
1.3 猪GBP2基因SNP及其蓝耳病抗性遗传效应的分析
1.4 猪Mx1基因SNP及其蓝耳病抗性遗传效应的分析
1.5 猪NID2基因SNP及其蓝耳病抗性遗传效应的分析
2 蓝耳病抗性分子标记(SNP)检测试剂盒的研制
2.1 试剂盒组分探索试验及保质期的探讨
2.2 试剂盒特异性的分析
2.3 试剂盒灵敏度检测的探讨
2.4 试剂盒的外包装和内容
2.5 试剂盒操作说明书的拟定
第五章 讨论
1 关于蓝耳病抗性SNPs的筛选
1.1 实验材料以及方法的分析
1.2 候选基因多态性与猪蓝耳病抗性的关联分析
2 关于蓝耳病抗性分子标记检测试剂盒的分析
2.1 蓝耳病抗性分子标记检测试剂盒研制的前景
2.2 关于试剂盒的性能
3 小结
3.1 本研究的主要结果结论
3.2 本研究的创新点
3.3 本研究的不足之处与下一步计划
参考文献
在校期间发表文章
附录
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]唾液酸黏附素SN及其介导PRRSV感染猪肺泡巨噬细胞的研究进展[J]. 任钰为,江一波,张淑君. 湖北农业科学. 2011(11)
[2]ESR和RYR1基因的多态性在监利猪、大白猪及杂交大监猪群中分布特征的探讨[J]. 刘文举,左本武,何年华,刘俊,刘洪彬,陈胜波,龚晓玲,余思义,童勤,余勇,王成,张淑君. 上海畜牧兽医通讯. 2009(01)
[3]野猪和16个国内外猪种Mx1基因第14外显子多态性分析[J]. 吴圣龙,包文斌,鞠慧萍,丁浩,李碧春,朱国强,陈国宏. 畜牧兽医学报. 2008(03)
[4]鸡MHC基因多态性与抗病性状的相关性研究进展[J]. 李国勤,卢立志,王得前,沈军达,陶争荣,赵爱珍,原爱平. 农业生物技术学报. 2006(01)
[5]片段长度差异等位基因特异性PCR—一种改良的SNP分型新方法[J]. 黄代新,杨庆恩,赵贵森. 法医学杂志. 2005(01)
[6]等位基因特异性引物PCR技术及其应用研究[J]. 马厚勋,牛永红,李章勇,谢正祥. 生物技术. 2005(01)
[7]PRRS病毒传播方式的新研究结果[J]. 李希林,Scott Dee. 国外畜牧学(猪与禽). 2004(02)
[8]畜禽某些疾病的遗传控制与抗病育种[J]. 施启顺. 中国畜牧杂志. 2004(02)
[9]奶牛MHC基因多态性及其与经济性状关系的研究进展[J]. 叶素成,储明星,陈国宏. 遗传. 2003(01)
[10]第22种氨基酸和无义密码子的重新诠释[J]. 明镇寰,钟立人. 生物化学与生物物理进展. 2002(06)
硕士论文
[1]荷斯坦奶牛隐性遗传疾病检测技术的建立及产奶性状相关分子标记的筛选[D]. 王成.华中农业大学 2010
[2]猪五个功能基因变异及其抗病遗传效应的研究[D]. 刘文举.华中农业大学 2009
[3]细菌对磺胺类药物耐药基因三重PCR检测试剂盒研制与应用[D]. 周万蓉.四川农业大学 2007
[4]绵羊MHC基因微卫星多态性及其与生产性状关系的研究[D]. 李建平.山东农业大学 2006
本文编号：3179478
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略词表(Abbreviation words)
第一章 文献综述
1 前言
2 PRRS流行动态
2.1 国内外流行特点
2.2 PRRSV传播方式
2.3 PRRS的防治措施
3 抗病育种的研究进展
3.1 抗病育种的意义
3.2 抗病机理
3.3 抗病育种的遗传基础
3.4 抗病育种的措施
3.5 抗病候选基因的研究进展
4 基因多态性分析的方法
4.1 SNP
4.2 PCR-RFLP
4.3 AS-PCR
第二章 研究目的与意义
第三章 材料与方法
1 试验材料
1.1 实验猪群及样本采集
1.2 性状记录
2 主要仪器及设备
3 主要试剂及配制
3.1 常用试剂
3.2 主要试剂的配制
3.3 Taq酶、回收试剂盒、测序和限制性内切酶
4 试验方法
4.1 猪基因组中提取DNA
4.2 基因组DNA质量和浓度的检测
4.3 主要分子生物学软件和数据统计分析软件
4.4 PCR引物的稀释
4.5 AS-PCR反应体系及反应程序
4.6 PCR-RFLP分析
4.7 PCR产物的回收测序
5 分子标记的统计分析方法
5.1 等位基因频率和基因型频率
5.2 各基因型发病风险度分析
6 五个候选基因SNP筛选及其检测
6.1 猪MBL2基因SNP位点检测
6.2 猪DUSP1基因SNP位点检测
6.3 猪GBP2基因SNP位点检测
6.4 猪Mx1基因SNP位点检测
6.5 猪NID2基因SNP位点检测
7 蓝耳病抗性分子标记(SNP)检测试剂盒的研制
7.1 试剂组分的探讨
7.2 试剂保质期的探讨
7.3 试剂盒特异性的分析
7.4 试剂盒灵敏度的分析
7.5 试剂盒的外包装和内容
7.6 试剂盒的操作使用说明
第四章 结果与分析
1 猪五个候选基因SNP及其蓝耳病抗性遗传效应的分析
1.1 猪MBL2基因SNP及其蓝耳病抗性遗传效应的分析
1.2 猪DUSP1基因SNP及其蓝耳病抗性遗传效应的分析
1.3 猪GBP2基因SNP及其蓝耳病抗性遗传效应的分析
1.4 猪Mx1基因SNP及其蓝耳病抗性遗传效应的分析
1.5 猪NID2基因SNP及其蓝耳病抗性遗传效应的分析
2 蓝耳病抗性分子标记(SNP)检测试剂盒的研制
2.1 试剂盒组分探索试验及保质期的探讨
2.2 试剂盒特异性的分析
2.3 试剂盒灵敏度检测的探讨
2.4 试剂盒的外包装和内容
2.5 试剂盒操作说明书的拟定
第五章 讨论
1 关于蓝耳病抗性SNPs的筛选
1.1 实验材料以及方法的分析
1.2 候选基因多态性与猪蓝耳病抗性的关联分析
2 关于蓝耳病抗性分子标记检测试剂盒的分析
2.1 蓝耳病抗性分子标记检测试剂盒研制的前景
2.2 关于试剂盒的性能
3 小结
3.1 本研究的主要结果结论
3.2 本研究的创新点
3.3 本研究的不足之处与下一步计划
参考文献
在校期间发表文章
附录
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]唾液酸黏附素SN及其介导PRRSV感染猪肺泡巨噬细胞的研究进展[J]. 任钰为,江一波,张淑君. 湖北农业科学. 2011(11)
[2]ESR和RYR1基因的多态性在监利猪、大白猪及杂交大监猪群中分布特征的探讨[J]. 刘文举,左本武,何年华,刘俊,刘洪彬,陈胜波,龚晓玲,余思义,童勤,余勇,王成,张淑君. 上海畜牧兽医通讯. 2009(01)
[3]野猪和16个国内外猪种Mx1基因第14外显子多态性分析[J]. 吴圣龙,包文斌,鞠慧萍,丁浩,李碧春,朱国强,陈国宏. 畜牧兽医学报. 2008(03)
[4]鸡MHC基因多态性与抗病性状的相关性研究进展[J]. 李国勤,卢立志,王得前,沈军达,陶争荣,赵爱珍,原爱平. 农业生物技术学报. 2006(01)
[5]片段长度差异等位基因特异性PCR—一种改良的SNP分型新方法[J]. 黄代新,杨庆恩,赵贵森. 法医学杂志. 2005(01)
[6]等位基因特异性引物PCR技术及其应用研究[J]. 马厚勋,牛永红,李章勇,谢正祥. 生物技术. 2005(01)
[7]PRRS病毒传播方式的新研究结果[J]. 李希林,Scott Dee. 国外畜牧学(猪与禽). 2004(02)
[8]畜禽某些疾病的遗传控制与抗病育种[J]. 施启顺. 中国畜牧杂志. 2004(02)
[9]奶牛MHC基因多态性及其与经济性状关系的研究进展[J]. 叶素成,储明星,陈国宏. 遗传. 2003(01)
[10]第22种氨基酸和无义密码子的重新诠释[J]. 明镇寰,钟立人. 生物化学与生物物理进展. 2002(06)
硕士论文
[1]荷斯坦奶牛隐性遗传疾病检测技术的建立及产奶性状相关分子标记的筛选[D]. 王成.华中农业大学 2010
[2]猪五个功能基因变异及其抗病遗传效应的研究[D]. 刘文举.华中农业大学 2009
[3]细菌对磺胺类药物耐药基因三重PCR检测试剂盒研制与应用[D]. 周万蓉.四川农业大学 2007
[4]绵羊MHC基因微卫星多态性及其与生产性状关系的研究[D]. 李建平.山东农业大学 2006
本文编号：3179478
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