牛星状病毒和牛诺如病毒双重PCR检测方法的建立及应用

发布时间：2021-05-11 12:17

　　为建立能同时快速检测牛星状病毒（BAstV）和牛诺如病毒（BNoV）的方法,本研究根据BAstV ORF1a基因和BNoV RdRp基因设计了2对特异性引物,通过优化反应条件,建立了能够同时检测BAstV和BNoV的双重PCR方法。特异性试验结果显示,该方法对牛轮状病毒等5种犊牛腹泻常见病原的扩增结果均为阴性,仅BAstV和BNoV扩增结果为阳性,特异性较强;敏感性试验结果显示,该方法对BAstV和BNoV重组质粒的最低检测限分别为1.09×10³拷贝/μL和1.42×10³拷贝/μL,敏感性较高;批内和批间试验结果一致,该方法重复性好。利用该方法和各病原单一PCR方法同时对221份河南省犊牛腹泻粪便样品进行检测,BAstV和BNoV的阳性检出率分别为18.1%和9.96%,两种方法符合率为100%。本研究在国内首次建立了检测BAstV和BNoV的双重PCR方法,其特异性强,敏感性高,重复性好,为BAstV和BNoV的鉴别检测及其分子流行病学调查提供了技术支持。 

【文章来源】：中国预防兽医学报. 2020,42(08)北大核心CSCD

【文章页数】：5 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 主要实验材料
    1.2 引物设计与合成
    1.3 单一PCR的扩增
    1.4 重组质粒标准品的构建与鉴定
    1.5 双重PCR反应体系及条件的优化
    1.6 特异性试验
    1.7 敏感性试验
    1.8 重复性试验
    1.9 临床样品的检测
2 结果
    2.1 重组质粒标准品的鉴定结果
    2.2 双重PCR方法的构建及优化
    2.3 特异性试验结果
    2.4 敏感性试验结果
    2.5 重复性试验
    2.6 临床样品检测
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]犬瘟热与犬副流感病毒双重一步法RT-PCR检测方法的建立[J]. 赵国清,尹斐斐,安泓霏,王贵升,胡永浩.  中国预防兽医学报. 2018(09)



本文编号：3181394