过表达SOX9改良软骨组织工程种子细胞的可行性研究

发布时间：2021-05-12 02:41

　　自体软骨细胞是软骨组织工程最佳种子细胞,但存在细胞外基质合成能力的局限性。为了获得合成细胞外基质能力更强的种子细胞,构建了pcDNA3.1（+）-SOX9哺乳动物过表达载体质粒,脂质体转染分离培养的大鼠关节软骨细胞。免疫荧光法和Western blot检测SOX9过表达效率,实时荧光定量PCR和Western blot检测CollagenⅡ（Ⅱ型胶原）和Aggrecan（蛋白聚糖）mRNA和蛋白的表达,阿利新蓝染色检测细胞外基质合成情况。结果表明,成功过表达软骨细胞的SOX9基因,细胞外基质分泌能力明显增强,过表达SOX9基因能够促进细胞外基质分泌,通过转染过表达SOX9来改良软骨种子细胞具有可行性。 

【文章来源】：动物医学进展. 2020,41(12)北大核心

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 试剂
        1.1.2 主要仪器
    1.2 方法
        1.2.1 体外扩增大鼠SOX9基因
        1.2.2 构建和鉴定pUC19-SOX9克隆载体
        1.2.3 构建和鉴定pcDNA3.1(+)-SOX9哺乳动物过表达载体
        1.2.4 大鼠关节软骨细胞的分离和培养
        1.2.5 体外转染大鼠关节软骨细胞
        1.2.6 免疫荧光法检测SOX9过表达效率
        1.2.7 实时荧光定量PCR检测mRNA的表达
        1.2.8 Western blot检测蛋白表达
        1.2.9 阿利新蓝染色
2 结果
    2.1 目的基因SOX9扩增结果
    2.2 克隆载体pUC19-SOX9的鉴定
    2.3 哺乳动物过表达载体pcDNA3.1(+)-SOX9的鉴定
    2.4 大鼠软骨细胞的鉴定
    2.5 成功转染过表达SOX9基因
    2.6 过表达SOX9上调细胞外基质合成
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]非甾体类抗炎药物对膝关节骨性关节患者镇痛及膝关节功能的影响观察[J]. 王沐,蔡楠楠,朱法政.  湖南师范大学学报(医学版). 2019(04)
[2]中药对照软骨保护剂改善膝骨关节炎功能活动的系统评价[J]. 詹倩,胡广操,王敏龙,张梦娇,沈钦荣.  浙江中医药大学学报. 2019(02)
[3]The art of building bone: emerging role of chondrocyte-to-osteoblast transdifferentiation in endochondral ossification[J]. Patrick Aghajanian,Subburaman Mohan.  Bone Research. 2018(03)



本文编号：3182575