管花肉苁蓉醇提物对雄性大鼠性激素水平的影响及CYP450酶介导的机理研究
发布时间：2021-05-12 09:07
2005年管花肉苁蓉被收录入《中国药典》中，然而它对性激素水平的影响及机制并不清楚，因此本试验旨在研究管花肉苁蓉对雄性大鼠孕酮和睾酮水平的影响及其作用机制。CYP11A1和CYP17A1两个酶是睾丸间质细胞中睾酮合成路径的关键酶，肝脏中的CYP3A4是睾酮和孕酮的代谢酶，研究这三种酶的变化对了解肉苁蓉影响睾酮水平的机制非常重要。由于上述三种酶均属于P450酶家族，存在于细胞微粒体中，故本研究首先要建立组织微粒体的制备方法。该项研究内容主要包括三个方面：1.微粒体制备方法的建立由于肝脏中含有丰富的P450酶，因此以肝脏作为研究对象，制备肝脏微粒体，建立钙盐沉淀法。计算得所制备微粒体的P450蛋白含量约为0.55nmol/mg，处于正常范围内（0.4-1.0nmol/mg）。采用CO还原差示光谱法检测所制备的新鲜组织微粒体中总P450酶的活性，结果显示样品在波长为450nm处有特异性吸收峰。底物探针法检测微粒体中CYP2E1的酶活性，紫外分光光度法测其代谢产物的含量。结果均显示所制备微粒体活性良好，表明该方法建立成功。2.管花肉苁蓉提取物对雄性大鼠性激素水平的影响及机制研究干燥的管花肉苁蓉...
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：56 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
1.1 肉苁蓉的简介
1.2 肉苁蓉的植物学概况和分布
1.3 肉苁蓉的化学成分
1.3.1 苯乙醇苷类
1.3.2 环烯醚萜类
1.3.3 其他成分
1.4 肉苁蓉的质量控制
1.5 肉苁蓉的药理作用
1.5.1 补肾壮阳
1.5.2 促进骨骼生成
1.5.3 抗氧化和抗凋亡作用
1.5.4 免疫调节作用
1.5.5 神经保护作用
1.5.6 治疗肠道疾病
1.5.7 肝保护作用
1.5.8 抗疼痛和抗炎作用
1.5.9 抗疲劳作用
1.6 睾酮合成路径中的类固醇激素合成酶
1.6.1 睾酮合成路径
1.6.2 类固醇激素合成酶
1.7 化学物质对 CYP 酶的影响
1.8 本研究的目的和意义
第二章 组织微粒体制备方法的建立
2.1 材料
2.1.1 试剂
2.1.2 实验动物
2.1.3 所用溶液配制
2.1.4 所用仪器
2.2 试验方法
2.2.1 肝脏微粒体的制备
2.2.2 肝脏微粒体蛋白浓度的测定
2.2.3 所制备的微粒体蛋白活性鉴定
2.2.4 CYP2E1 活性测定
2.3 试验结果
2.3.1 微粒体蛋白含量测定
2.3.2 肝脏微粒体活性测定
2.3.3 CYP2E1 酶活性的测定
2.4 讨论
2.5 小结
第三章 管花肉苁蓉对大鼠性激素水平的影响及部分机理研究
3.1 材料
3.1.1 药材和试剂
3.1.2 实验动物
3.1.3 所用溶液配制
3.1.4 所用仪器
3.2 试验方法
3.2.1 管花肉苁蓉提取物的制备
3.2.2 管花肉苁蓉提取物中苯乙醇苷类物质的含量测定
3.2.3 给药方案
3.2.4 动物处理
3.2.5 激素水平测定
3.2.6 睾丸和肝脏微粒体的制备
3.2.7 微粒体蛋白浓度测定
3.2.8 睾丸微粒体活性检测
3.2.9 CYP11A1、CYP17A1 和 CYP3A4 蛋白表达量检测
3.2.10 免疫组织化学法检测 CYP11A1 和 CYP17A1 蛋白表达量
3.3 结果和分析
3.3.1 管花肉苁蓉提取物中苯乙醇苷类物质的含量
3.3.2 管花肉苁蓉对雄性大鼠生殖系统器官的影响
3.3.3 管花肉苁蓉对雄性大鼠性激素水平的影响
3.3.4 微粒体蛋白浓度测定
3.3.5 微粒体活性鉴定
3.3.6 Western Blot 法检测 CYP11A1、CYP17 A1 和 CYP3A4 的表达
3.3.7 免疫组化法检测睾丸组织中 CYP11A1 和 CYP17A1 的表达
3.4 讨论
3.5 小结
第四章 管花肉苁蓉的毒性作用
4.1 材料
4.1.1 试剂
4.1.2 所用溶液配制
4.1.3 所用仪器
4.2 试验方法
4.2.1 肝脏和睾丸组织的石蜡切片制作
4.2.2 石蜡切片 HE 染色
4.2.3 血清中 ALT 水平的检测
4.3 结果和分析
4.3.1 管花肉苁蓉对大鼠肝指数及血清生化指标的影响
4.3.2 管花肉苁蓉对大鼠肝脏组织的影响
4.3.3 管花肉苁蓉对大鼠睾丸组织的影响
4.4 讨论
4.5 小结
结论
参考文献
致谢
作者简介
【参考文献】：
期刊论文
[1]邻苯二甲酸二乙基己基酯暴露对青春期大鼠卵巢StAR、P450scc基因表达的影响[J]. 刘淑敏,万力,常薇. 卫生研究. 2014(01)
[2]双酚A对体外培养小鼠睾丸睾酮合成的影响及机制[J]. 黄洁,徐华,高志斌,李敏,朱彦锋,李云. 卫生研究. 2013(04)
[3]肉苁蓉总苷对原代培养小鼠肝细胞酒精损伤保护作用研究[J]. 罗慧英,刘渊,杨焕. 中国临床药理学与治疗学. 2011(08)
[4]肉苁蓉研究及其产业发展[J]. 屠鹏飞,姜勇,郭玉海,李晓波,田永祯. 中国药学杂志. 2011(12)
[5]新疆肉苁蓉多糖清除活性氧自由基[J]. 王国卫,赵芳. 光谱实验室. 2011(03)
[6]肉苁蓉茶的毒理学安全性实验研究[J]. 彭亮,赵鹏,李彬,张洁宏,覃辉艳,姚思宇,王彦武. 应用预防医学. 2011(01)
[7]双酚A对大鼠未成年Leydig细胞睾酮合成的影响及机制[J]. 张虎祥,张海燕,陈祥义,廖鸿力,董磊,吴亮,陈国荣. 医学研究杂志. 2011(01)
[8]肉苁蓉苯乙醇苷对大鼠精子体外氧化损伤的保护作用研究[J]. 李刚,朱文斌,牛飞,张宏利. 时珍国医国药. 2010(09)
[9]肉苁蓉含药血清诱导骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的实验研究[J]. 曾建春,樊粤光,刘建仁,曾意荣,易春智,阎亮. 中国骨伤. 2010(08)
[10]邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯对大鼠睾丸发育及StAR、CYP19a1、CYP11a1基因表达的影响[J]. 逯晓波,于涛,马明月,靳翠红,刘秋芳,巫生文,潘亮. 卫生研究. 2010(03)
本文编号：3183145
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：56 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
1.1 肉苁蓉的简介
1.2 肉苁蓉的植物学概况和分布
1.3 肉苁蓉的化学成分
1.3.1 苯乙醇苷类
1.3.2 环烯醚萜类
1.3.3 其他成分
1.4 肉苁蓉的质量控制
1.5 肉苁蓉的药理作用
1.5.1 补肾壮阳
1.5.2 促进骨骼生成
1.5.3 抗氧化和抗凋亡作用
1.5.4 免疫调节作用
1.5.5 神经保护作用
1.5.6 治疗肠道疾病
1.5.7 肝保护作用
1.5.8 抗疼痛和抗炎作用
1.5.9 抗疲劳作用
1.6 睾酮合成路径中的类固醇激素合成酶
1.6.1 睾酮合成路径
1.6.2 类固醇激素合成酶
1.7 化学物质对 CYP 酶的影响
1.8 本研究的目的和意义
第二章 组织微粒体制备方法的建立
2.1 材料
2.1.1 试剂
2.1.2 实验动物
2.1.3 所用溶液配制
2.1.4 所用仪器
2.2 试验方法
2.2.1 肝脏微粒体的制备
2.2.2 肝脏微粒体蛋白浓度的测定
2.2.3 所制备的微粒体蛋白活性鉴定
2.2.4 CYP2E1 活性测定
2.3 试验结果
2.3.1 微粒体蛋白含量测定
2.3.2 肝脏微粒体活性测定
2.3.3 CYP2E1 酶活性的测定
2.4 讨论
2.5 小结
第三章 管花肉苁蓉对大鼠性激素水平的影响及部分机理研究
3.1 材料
3.1.1 药材和试剂
3.1.2 实验动物
3.1.3 所用溶液配制
3.1.4 所用仪器
3.2 试验方法
3.2.1 管花肉苁蓉提取物的制备
3.2.2 管花肉苁蓉提取物中苯乙醇苷类物质的含量测定
3.2.3 给药方案
3.2.4 动物处理
3.2.5 激素水平测定
3.2.6 睾丸和肝脏微粒体的制备
3.2.7 微粒体蛋白浓度测定
3.2.8 睾丸微粒体活性检测
3.2.9 CYP11A1、CYP17A1 和 CYP3A4 蛋白表达量检测
3.2.10 免疫组织化学法检测 CYP11A1 和 CYP17A1 蛋白表达量
3.3 结果和分析
3.3.1 管花肉苁蓉提取物中苯乙醇苷类物质的含量
3.3.2 管花肉苁蓉对雄性大鼠生殖系统器官的影响
3.3.3 管花肉苁蓉对雄性大鼠性激素水平的影响
3.3.4 微粒体蛋白浓度测定
3.3.5 微粒体活性鉴定
3.3.6 Western Blot 法检测 CYP11A1、CYP17 A1 和 CYP3A4 的表达
3.3.7 免疫组化法检测睾丸组织中 CYP11A1 和 CYP17A1 的表达
3.4 讨论
3.5 小结
第四章 管花肉苁蓉的毒性作用
4.1 材料
4.1.1 试剂
4.1.2 所用溶液配制
4.1.3 所用仪器
4.2 试验方法
4.2.1 肝脏和睾丸组织的石蜡切片制作
4.2.2 石蜡切片 HE 染色
4.2.3 血清中 ALT 水平的检测
4.3 结果和分析
4.3.1 管花肉苁蓉对大鼠肝指数及血清生化指标的影响
4.3.2 管花肉苁蓉对大鼠肝脏组织的影响
4.3.3 管花肉苁蓉对大鼠睾丸组织的影响
4.4 讨论
4.5 小结
结论
参考文献
致谢
作者简介
【参考文献】：
期刊论文
[1]邻苯二甲酸二乙基己基酯暴露对青春期大鼠卵巢StAR、P450scc基因表达的影响[J]. 刘淑敏,万力,常薇. 卫生研究. 2014(01)
[2]双酚A对体外培养小鼠睾丸睾酮合成的影响及机制[J]. 黄洁,徐华,高志斌,李敏,朱彦锋,李云. 卫生研究. 2013(04)
[3]肉苁蓉总苷对原代培养小鼠肝细胞酒精损伤保护作用研究[J]. 罗慧英,刘渊,杨焕. 中国临床药理学与治疗学. 2011(08)
[4]肉苁蓉研究及其产业发展[J]. 屠鹏飞,姜勇,郭玉海,李晓波,田永祯. 中国药学杂志. 2011(12)
[5]新疆肉苁蓉多糖清除活性氧自由基[J]. 王国卫,赵芳. 光谱实验室. 2011(03)
[6]肉苁蓉茶的毒理学安全性实验研究[J]. 彭亮,赵鹏,李彬,张洁宏,覃辉艳,姚思宇,王彦武. 应用预防医学. 2011(01)
[7]双酚A对大鼠未成年Leydig细胞睾酮合成的影响及机制[J]. 张虎祥,张海燕,陈祥义,廖鸿力,董磊,吴亮,陈国荣. 医学研究杂志. 2011(01)
[8]肉苁蓉苯乙醇苷对大鼠精子体外氧化损伤的保护作用研究[J]. 李刚,朱文斌,牛飞,张宏利. 时珍国医国药. 2010(09)
[9]肉苁蓉含药血清诱导骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的实验研究[J]. 曾建春,樊粤光,刘建仁,曾意荣,易春智,阎亮. 中国骨伤. 2010(08)
[10]邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯对大鼠睾丸发育及StAR、CYP19a1、CYP11a1基因表达的影响[J]. 逯晓波,于涛,马明月,靳翠红,刘秋芳,巫生文,潘亮. 卫生研究. 2010(03)
本文编号：3183145
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