猪繁殖与呼吸综合征病毒编码蛋白对TLR3和IL-10表达的影响

发布时间：2021-05-14 01:44

　　猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）是影响世界养猪业的重要病原之一,造成巨大经济损失。PRRSV可通过多种途径宿主逃避免疫应答,包括调节IL-10、抑制巨噬细胞和树突状细胞功能和抑制Ⅰ型干扰素（IFN-α/β）产生等,从而导致病毒持续感染,但其分子机制尚不十分清楚。为了探究PRRSV编码蛋白对TLR3和IL-10表达影响,本研究构建了PRRSV部分非结构蛋白的真核表达质粒,证明Nsp1和Nsp11可以抑制TLR3启动子活性,初步探索了其可能机制；同时还构建了PRRSV结构蛋白真核表达质粒,证明GP5和N蛋白可以诱生IL-10表达；另外,还构建了Nsp4,Nsp7,Nsp12的真核表达质粒,观察了其作为基因疫苗的免疫特性。具体研究内如下：1.PRRSV 3个非结构蛋白对TLR3启动子活性的影响及其机理PRRSV ORF1a和ORF1b可以翻译形成14个病毒非结构蛋白,其中部分非结构蛋白具有抑制I型干扰素活性的功能。TLR3是先天性免疫中重要的受体分子,它经dsRNA刺激后可以诱导产生干扰素和促炎症因子,启动先天性免疫反应。为了探究PRRSV非结构蛋白对TLR3转录表达的影响,本研究构建了... 

【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：98 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 猪繁殖与呼吸综合征病毒蛋白生物学结构与免疫抑制机制研究进展
    1 病毒蛋白生物学结构
        1.1 病毒基因组结构与复制
        1.2 病毒结构蛋白与生物学结构
        1.3 病毒非结构蛋白与生物学结构
    2 病毒免疫抑制与分子机理
        2.1 Ⅰ型干扰素信号通路及PRRSV对其抑制作用
        2.2 白细胞介素-10及PRRSV对其诱生作用
    参考文献
第二章 PRRSV 3个非结构蛋白对TLR3启动子活性的影响及其机理
    摘要
    1 材料和方法
        1.1 菌株、质粒、细胞
        1.2 主要试剂
        1.3 重组真核表达质粒的构建
        1.4 目的基因真核质粒表达与鉴定
        1.5 PRRSV NSPs对TLR3启动子活性的影响
        1.6 不同剂量Nsp11对TLR3启动子活性的影响
        1.7 PRRSV Nsp11对IFN-β启动子活性的影响
        1.8 Ⅰ型干扰素对TLR3启动子活性的影响
        1.9 Nsp11对INF-β诱导TLR3启动子活性的影响
        1.10 数据统计分析
    2 结果
        2.1 非结构蛋白基因的扩增
        2.2 重组表达质粒的酶切鉴定
        2.3 目的基因在BHK-21细胞中的表达与鉴定
        2.4 PRRSV NSPs对TLR3启动子活性的影响
        2.5 Nsp11对TLR3启动子活性呈剂量依赖性抑制
        2.6 Nsp11对IFN-β启动子活性的抑制
        2.7 Ⅰ型干扰素可以激发TLR3启动子活性
        2.8 Nsp11以抑制INF-β诱导下的TLR3启动子活性
    3 讨论
    参考文献
    ABSTRACT
第三章 PRRSV结构蛋白的真核表达及其对IL-10启动子活性的影响
    摘要
    1 材料和方法
        1.1 菌株、质粒、细胞
        1.2 主要试剂
        1.3 重组真核表达质粒的构建
        1.4 目的基因真核质粒表达与鉴定
        1.5 PRRSV结构蛋白对IL-10启动子活性的影响
        1.6 数据统计分析
    2 结果
        2.1 PRRSV结构蛋白基因PCR扩增
        2.2 重组真核表达质粒的酶切鉴定
        2.3 PRRSV结构蛋白基因的表达与鉴定
        2.4 PRRSV结构蛋白对IL-10启动子活性的影响
    3 讨论
    参考文献
    ABSTRACT
第四章 PRRSV NSP4和NSP7及NSP12基因疫苗的构建与小鼠免疫特性
    摘要
    1 材料与方法
        1.1 病毒、菌株、质粒、细胞与实验动物
        1.2 主要试剂
        1.3 重组真核表达质粒的构建
        1.4 目的基因的真核表达与鉴定
        1.5 免疫用重组真核表达质粒的制备
        1.6 Nsp4、Nsp7和Nsp12基因大肠杆菌表达与纯化抗原的制备
        1.7 小鼠免疫实验
        1.8 抗体效价的测定
        1.9 淋巴细胞增殖试验
        1.10 细胞因子的测定
    2 结果
        2.1 Nsp4、Nsp7和Nsp12及GM-CSF基因的扩增
        2.2 Nsp4、Nsp7和Nsp12重组真核表达载体酶切鉴定
        2.3 Nsp4、Nsp7和Nsp12真核表达与鉴定
        2.4 目的基因原核表达与纯化蛋白制各
        2.5 免疫小鼠ELISA抗体水平
        2.6 免疫小鼠淋巴细胞转化增殖刺激指数
        2.7 细胞因子的测定
    3 讨论
    参考文献
    ABSTRACT
全文总结
致谢



本文编号：3185027